茶葉是中國傳統(tǒng)植物來源飲品，具有悠久的飲用歷史。茶葉中富含多種營養(yǎng)成分和揮發(fā)性物質(zhì)，其主要活性物質(zhì)含量隨產(chǎn)地不同而有所差異，有效成分的種類和含量成為茶葉品質(zhì)的重要評價依據(jù)。根據(jù)茶葉采集和制作形式的不同可以分為綠茶、紅茶、黃茶、青茶（烏龍茶）、黑茶和白茶6大類。茶葉中最主要的抗氧化活性成分為茶多酚（Teapolyphenols，TP），茶多酚是一大類多羥基酚類化合物的總稱，除此之外，茶葉中還包含有咖啡堿、氨基酸、茶多糖和維生素等營養(yǎng)成分。茶多酚約占茶葉干重的20%～30%，是茶葉中最重要抗氧化保健成分。茶多酚主要包括黃烷醇類、花色苷類、黃酮類、黃酮醇類和酚酸類等，其中主要的揮發(fā)性成分是兒茶素類化合物約占60%～80%，包括兒茶素、表兒茶素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、表兒茶素沒食子酸酯、表沒食子兒茶素、沒食子酸和咖啡因等。茶葉中茶多酚種類和含量隨季節(jié)不同而變化，春季茶葉中表沒食子兒茶素沒食子酸酯（epigallocatechingallate，EGCG）含量要高于秋季。茶多酚具有抗氧化、調(diào)節(jié)免疫、解毒、抗輻射和抗疲勞等多種功效，但其組成及含量隨品種、采摘季節(jié)期及產(chǎn)地等多方面的影響。茶多酚通常從茶葉中提取，其中兒茶素類化合物占茶多酚的60%～80%，其次是黃酮類，其他酚類物質(zhì)較少。

茶多酚除存在在茶葉、茶樹花等多種茶樹資源中。沙棘中茶多酚根據(jù)提取工藝不同含量可以達到11.3%～16.9%。茶多酚也是核桃和枇杷中活性成分。毛枝連蕊茶中綠葉和紅葉植株葉片中可溶性糖、茶多酚和總花青苷。

茶多酚易溶于熱水、乙酸乙酯、乙醇，微溶于油脂，難溶有機溶劑。茶多酚具有一定的吸濕性，可進行絡(luò)合反應、氧化還原反應等。納米磁珠可以實現(xiàn)茶多酚的快速提取分離。茶葉中茶多酚在提取過程中特別是加熱時可能受到破壞，在定量分析的過程中需建立可靠的分析方法實現(xiàn)定量。

兒茶酚中不同成分含量是進行茶葉品質(zhì)等植物鑒別的重要依據(jù)。茶多酚為多酚類物質(zhì)具有天然抗氧化能力，在提取過程中可能會發(fā)生氧化還原反應，所以合適的提取工藝條件對茶多酚的定量檢測至關(guān)重要。分光光度法是測定多酚類物質(zhì)含量的常用方法，主要包括紫外分光光度法。主要活性成分茶多酚、總皂苷、總黃酮和總多糖。茶多酚可以采用紅外光譜法進行定性和定量檢測。液相色譜質(zhì)譜法測定茶葉中茶多酚操作更為復雜。紫外分光光度法測定相對靈敏度較低，紅外光譜法的定量測定屬半定量，茶多酚中多酚類物質(zhì)結(jié)構(gòu)接近均為兒茶素類結(jié)構(gòu)，同時茶多酚中多種活性成分物質(zhì)的種類和含量以及比例對評價茶葉品質(zhì)和進行其他含有茶多酚植物品種鑒別具有重要意義。

本研究利用高效液相色譜法建立了同時測定6種主要茶多酚的同時定量分析方法，該方法可以用于茶葉等植物產(chǎn)品中茶多酚種類及含量的檢測，對植物鑒定和品質(zhì)確認具有重要意義。白茶屬于輕微發(fā)酵茶，綠茶屬未發(fā)酵茶，均屬我國六大茶品種。白茶因獨特的健康價值及可陳放的特點而受到消費者和投資者的青睞，產(chǎn)銷量與市場占有率不斷攀升，2013年～2016年，全國白茶年產(chǎn)量連續(xù)四年保持了15%左右的增幅。不同提取條件對茶葉中主要成分的溶出有影響。本研究利用響應面法優(yōu)化茶葉中不同提取方法的提取工藝，選擇最優(yōu)提取工藝，在此基礎(chǔ)上利用高效液相色譜完成不同茶葉中茶多酚種類和含量定量測定，為茶葉品種和植物類型鑒別提供重要的方法學支持。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

沒食子酸標準品（純度均≥98%）、沒食子酸兒茶素沒食子酸酯標準品（純度均≥98%）、表兒茶素標準品（純度均≥98%）、表沒食子酸兒茶素標準品（純度均≥98%）、表兒茶素沒食子酸酯標準品（純度均≥98%）、表沒食子酸兒茶素沒食子酸酯標準品（純度均≥98%），福林酚試劑（分析純），甲醇（色譜純）、甲酸（色譜純）、無水乙醇（分析純），試劑均購自阿拉丁公司。白茶樣品：貢眉白茶（產(chǎn)地福建福鼎，2018年），綠茶樣品：竹葉青（產(chǎn)地四川）。

1.2 儀器與設(shè)備

高效液相色譜（Agilent1260）：安捷倫科技（中國）有限公司；分析電子天平（AR224CN）：奧豪斯國際貿(mào)易（上海）有限公司；超聲波清洗機（SB-120DT）：上海予騰生物科技有限公司；集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（DF-101S）：上海凌科實業(yè)發(fā)展有限公司；中藥材粉碎機（DFT150）：上海新諾儀器設(shè)備有限公司；紫外-可見分光光度計（UV-1800PC-DS2）：上海美譜達儀器有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 樣品制備

取茶葉樣品粉碎，準確稱取0.5g茶葉粉碎過80目篩，干燥至恒重待用。

1.3.2 提取工藝優(yōu)化

本實驗利用響應面法優(yōu)化茶葉中茶多酚提取工藝。

1.3.2.1 單因素實驗

選取超聲提取和熱水浸提兩種提取方法，提取時間、提取溫度、固液比、溶劑濃度4個單因素，利用單因素實驗確定提取條件范圍。

1.3.2.2 CCD響應面法提取

根據(jù)單因素試驗結(jié)果，分別選取溫度、乙醇濃度、提取時間作為響應變量，變量的水平以-1、0、1表示，以茶葉提取物中總酚含量為響應值，利用軟件DesignExpert8.0.6進行三因素三水平實驗設(shè)計和數(shù)據(jù)分析。茶葉中茶多酚提取配方優(yōu)化試驗設(shè)計如表1所示。

1.3.2.3 總酚含量的測定

準確稱取沒食子酸標準品200mg加少量70％乙醇將樣品溶化，用70％乙醇定容至100mL搖勻，靜置。再用移液器吸取20mL，用70％乙醇定容至100mL，搖勻，配成濃度為400μg/mL的沒食子酸標準溶液，待用。準確吸取沒食子酸標準溶液0mL、0.05mL、0.1mL、0.15mL、0.2mL、0.25mL于試管中。分別加入蒸餾水2.0mL、1.95mL、1.9mL、1mL、1.85mL、1.8mL、1.75mL再各加入福林試劑1mL，充分振蕩后靜置3～4min，分別加入10％碳酸鈉1mL于25℃，搖勻置于恒溫水浴中反應2h，同時做試劑空白，于765nm下測定吸光度，以含量對吸光度進行直線回歸，計算回歸方程。將提取液離心，取上清液，按標準曲線繪制的測定方法，依次加入試劑，以試劑空白作參比，在765nm處測定吸光度，計算茶多酚含量作為響應值。

聲明：本文所用圖片、文字來源《中國食品添加劑》，版權(quán)歸原作者所有。如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請與本網(wǎng)聯(lián)系

相關(guān)鏈接：茶葉，沒食子酸，沒食子酸兒茶素沒食子酸酯，表沒食子酸兒茶素