4-己基間苯二酚(4-HR)作為一種能夠抑制褐變的新型抗氧化劑，能有效防止產(chǎn)品在儲(chǔ)存過(guò)程中由于多酚氧化酶的催化而產(chǎn)生氧化褐變或色澤變黑，因此在水產(chǎn)品保存中得到廣泛應(yīng)用，特別在蛋白質(zhì)豐富，極易褐變腐敗的鮮蝦保存中發(fā)揮著不可替代的作用。我國(guó)強(qiáng)制性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB2760-2014中明確規(guī)定鮮水產(chǎn)(僅限蝦類)中4-HR最大殘留量不得超過(guò)1mg/kg。但有些生產(chǎn)商或供應(yīng)商為了達(dá)到保鮮、護(hù)色的目的而在鮮蝦中過(guò)量添加4-HR，極易造成其殘留量超過(guò)限量的lmg/kg的規(guī)定。從而對(duì)人體產(chǎn)生一定的危害。目前4-HR測(cè)定還沒(méi)有統(tǒng)一的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，僅有一個(gè)地方標(biāo)準(zhǔn)和一個(gè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。主要檢測(cè)技術(shù)有氣相法、液相法、氣質(zhì)法、液質(zhì)法，但關(guān)于4-HR測(cè)定的不確定度還尚未見(jiàn)報(bào)道。

測(cè)量不確定度是表征合理地賦予被測(cè)量之值的分散性，與測(cè)量結(jié)果相關(guān)聯(lián)的參數(shù)，它能對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行客觀真實(shí)的評(píng)價(jià)，給出測(cè)量結(jié)果的可信程度。當(dāng)檢測(cè)結(jié)果在限量值附近時(shí)，實(shí)驗(yàn)室出具的檢測(cè)報(bào)告將直接影響到樣品合格與否的判定，因此開(kāi)展測(cè)量不確定度的分析與評(píng)定對(duì)確保測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性具有十分重要的意義。本文依據(jù)DB33/3007-2015《食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)食品中4-己基間苯二酚殘留量的測(cè)定》，對(duì)測(cè)量結(jié)果的不確定度進(jìn)行全面系統(tǒng)的評(píng)定，篩選出不確定度貢獻(xiàn)率較大的主要因素，在實(shí)驗(yàn)中加以重視和改進(jìn)，為實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制(如產(chǎn)品質(zhì)量臨界值時(shí)的判定)提供可靠依據(jù)，同時(shí)為檢測(cè)其他產(chǎn)品中4-HR殘留量的不確定度提供參考，評(píng)定方法參照J(rèn)JFll35-2015《化學(xué)分析測(cè)量不確定度評(píng)定》和JJFl059.1-2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》。

一、材料和方法

1、試劑和材料

4-己基問(wèn)苯二酚標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(純度為97％)：TRC公司；乙腈為色譜純；二氯甲烷、甲醇、丙酮和正己烷均為分析純。

2、主要儀器設(shè)備

Agilent1260Infinity高效液相色譜儀；電子天平：丹納和赫西特傳感工業(yè)有限公司；離心機(jī)：Thenno公司；旋渦混合儀：IKE公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：BUCHI公司；固相萃取裝置：安譜公司；氮?dú)獯蹈蓛x：Biotage公司；高速組織搗碎機(jī)：睿科公司。

3、檢測(cè)方法

（1）樣品前處理

根據(jù)DB33/3007-2015《食品中4-己基間苯二酚殘留量的測(cè)定》的要求：從原始樣品中取出代表性的樣品500g，去頭、去殼、去附肢，取可食部分。用組織搗碎機(jī)搗碎混勻，均分成兩份分別裝入到潔凈容器中作為試樣，密封并標(biāo)識(shí)。將試樣放入-18℃以下保存。稱取59(精確到0.01g)樣品置于50mL離心管中，加入10mL乙腈二氯甲烷溶液(體積比：7:3)，高速組織搗碎機(jī)勻漿2min，蓋塞，旋渦混勻lmin，超聲提取10min，8500r/min離心5min，取上清液轉(zhuǎn)入100mL旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，重復(fù)上述操作一次。合并提取液于45℃旋發(fā)近干，取7.5mL二氯甲烷分三次超聲溶解，合并，待凈化。將上述待凈化液轉(zhuǎn)至固相萃取柱中。用6mL正己烷淋洗，將固相萃取小柱抽至近干，用6mL甲醇丙酮溶液(體積比：1:1)洗脫，收集洗脫液。洗脫液于50℃氮?dú)獯蹈?，殘留物?.0mL流動(dòng)相溶解，過(guò)0.22μm的有機(jī)相為空濾膜，供液相色譜測(cè)定。

（2）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取0.1030g4-己基間苯二酚標(biāo)準(zhǔn)品(純度為97％)，用乙腈水溶液(體積比：6:4)溶解并定容至100mL，濃度為1mg/mL。

（3）色譜條件

色譜柱：C18(5μm，4.6×250mm)；柱溫：35℃；流動(dòng)相：乙腈-水(6+4)；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：10μL；熒光檢測(cè)器：激發(fā)波長(zhǎng)：280nm，發(fā)射波長(zhǎng)：310nm。

（4）數(shù)學(xué)模型

X：試樣中4-己基間苯二酚的含量，單位為毫克每千克(mg/kg)；

C：試樣溶液中4-己基間苯二酚的含量，單位為微克每毫升(μg/mL)；

V：試樣溶液定容體積，單位為毫升(mL)；

m：試樣質(zhì)量，單位為克(g)。

二、結(jié)果與分析

1、不確定結(jié)果的來(lái)源與分析

從數(shù)學(xué)模型和分析過(guò)程影響因素可知，試樣中4-己基間苯二酚測(cè)定結(jié)果的不確定度的主要來(lái)源于待測(cè)物濃度(C)、試樣稱量(m)、試樣定容(V)、測(cè)量重復(fù)性、方法的回收率。

2、不確定度分量的評(píng)定

（1）待測(cè)物濃度(C)引入的不確定度

C的不確定度由標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制和曲線擬合兩部分組成。標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制又分為儲(chǔ)備液的配制、以及標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的配制兩個(gè)過(guò)程。

①儲(chǔ)備液配制過(guò)程產(chǎn)生的不確定度u(c一1)。

標(biāo)準(zhǔn)品純度引入的不確定度：4-己基間苯二酚標(biāo)準(zhǔn)樣品的純度為≥97％，為B類評(píng)定，不確定度為a/k。依據(jù)經(jīng)驗(yàn)為等概率地落在區(qū)間內(nèi)，即均勻分布。

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