松針（Pine needle）為松科（Pinaceae）植物樹葉，廣泛分布于全球，共有10個屬約230多個品種，中國分布大約有10個屬約120多種。松針資源來源主要包括黃山松、油松、紅松、云南松、高山松、雪松等、白皮松、地盤松、巴山松、海南五針?biāo)?、火炬松等。松針揮發(fā)油通常以針葉樹嫩枝和綠葉作為原料，采用水蒸氣蒸餾、超臨界提取、有機溶劑等方法提取，一般松針含油量為0.4％～0.6％，多者達1％，具有殺菌、殺蟲、除臭、抗氧化等多種藥理活性，廣泛應(yīng)用于日用化工、醫(yī)藥和食品工業(yè)等領(lǐng)域。

目前，國內(nèi)外關(guān)于馬尾松、地中海松、加那利松、南歐黑松、樟子松、馬尾松、濕地松、云南松、油松等松樹種類的揮發(fā)油的成分研究已有報道，但至今未見俄羅斯松針以及加拿大冷杉針油成分對比研究報道。本實驗以俄羅斯松針、加拿大冷杉針作為研究對象，采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，采用GC/MS對其成分進行了分析，經(jīng)質(zhì)譜檢索后，匹配度結(jié)合保留指數(shù)對其定性，較好地鑒別了同分異構(gòu)體或同系物，避免了在定性過程中出現(xiàn)誤判，提高定性的準(zhǔn)確性。另外，通過對兩種不同松針精油揮發(fā)性成分進行了對比分析研究，為其在日用化工、醫(yī)藥和食品工業(yè)等領(lǐng)域應(yīng)用提供了指導(dǎo)。

一、材料與方法

1、材料與設(shè)備

（1）材料與試劑

俄羅斯松針葉、加拿大冷杉葉：購于市場；二氯甲烷、甲醇、正己烷：GR級，購置于百靈威科技有限公司；正構(gòu)烷烴C₇～C₃₀：購置于Sigma—Aidrich公司。

（2）儀器與設(shè)備

Agilent7890A/5975C氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用儀+自動進樣器（美國安捷倫科技有限公司）；萬分之一電子天平（瑞士MettlerTloede公司）；磨口揮發(fā)油提取儀（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）；10mL移液器（德國Eppendorf公司）。

2、方法

（1）松針葉油提取

取新鮮針葉樣品剪成0.5cm小段，稱取100g置于圓底燒瓶中，加入1000 mL蒸餾水，水蒸氣蒸餾法提取4 h后靜置分層3h，取得針葉油為黃色油狀物，用無水乙醚溶解并用無水硫酸鈉進行干燥，獲得松針油。

（2）松針油揮發(fā)性成分分析

準(zhǔn)確稱取松針油0.20g，用甲醇：二氯甲烷（體積比為1∶4）混合溶液稀釋到10mL，進樣前需要將樣品用0.45μm有機相濾膜過濾，直接進GC/MS分析。色譜條件：RXi～5sil MS石英毛細管柱（60m×0.25mm×0.25μm），載氣為氦氣（純度為99.99％），流速：1.0 mL/min。升溫程序：初始溫度50℃，保持2min；以3℃/min的速率升溫至180℃再以10℃/min的速率升溫至230℃，保持10min。進樣口溫度：250℃，進樣量：1.0μL，分流比：20∶1，溶劑延遲6min。質(zhì)譜條件：電轟擊電離（EI）源；離子源溫度：230℃；四極桿溫度：150℃；電離能量：70 eV；傳輸線溫度：280℃；掃描范圍（m/z）：40～450；質(zhì)譜檢索圖庫：NIST譜庫。

（3）定性方法

移取正構(gòu)烷烴C₇～C₃₀標(biāo)準(zhǔn)品，用正己烷溶液將其稀釋成質(zhì)量分數(shù)為5％溶液，準(zhǔn)確稱取松針油0.20g，用甲醇：二氯甲烷（體積比為1∶4）混合溶液稀釋到10mL，進樣前需要將樣品用0.45μm有機相濾膜過濾，直接進GC/MS分析。色譜條件：RXi～5sil MS石英毛細管柱（60m×0.25mm×0.25μm），載氣為氦氣（純度為99.99％），流速：1.0 mL/min。升溫程序：初始溫度50℃，保持2min；以3℃/min的速率升溫至180℃#再以lO℃/min的速率升溫至230℃，保持10min。進樣口溫度：250℃，進樣量：1.0μL，分流比：20∶1，溶劑延遲6min。質(zhì)譜條件：電轟擊電離（EI）源；離子源溫度：230℃；四極桿溫度：150℃；電離能量：70 eV；傳輸線溫度：280℃；掃描范圍（m/z）：40～450；質(zhì)譜檢索圖庫：NIST譜庫。求出正構(gòu)烷烴C₇～C₃₀保留時間，為下一步計算松針油中各成分保留指數(shù)作準(zhǔn)備。

根據(jù)VandenDool和Kratz的線性程序升溫的保留指數(shù)原理，利用自編軟件求得保留指數(shù)（KI）值：
 

式中：tx——被分析組分；

t_n——碳原子數(shù)；

t_n+1——n和n+l的正構(gòu)烷烴流出峰的保留時間（min）。

樣品松針油經(jīng)過GC/MS分析后，利用儀器自帶的NIST質(zhì)譜庫對松針油中化學(xué)成分進行自動檢索，然后通過自我開發(fā)的保留指數(shù)軟件求出各成分保留指數(shù)，將軟件計算的保留指數(shù)與ESO精油數(shù)據(jù)庫中保留指數(shù)進行比對（可接受誤差不超過3％），對其進行定性。

（4）數(shù)據(jù)處理

樣品松針油經(jīng)過GC/MS分析后，采用色譜峰面積歸-化法計算得出各化學(xué)成分相對百分含量。

二、結(jié)果與討論

1、松針油揮發(fā)性成分分析

松針油中成分經(jīng)GC/MS檢測所得到總離子流色譜圖見圖1、圖2，其結(jié)果采用Nistll進行檢索后結(jié)合ESO香精保留指數(shù)進行對比對其定性，利用面積歸-化法計算得出松針油中各成分相對百分含量，結(jié)果見表1所示。
 

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