糞大腸菌群是總大腸菌群中的一部分。 主要來自糞便遙在 44.5益溫度下能生長并發(fā)酵乳糖產酸產氣的大腸菌群稱為糞大腸菌群。用提高培養(yǎng)溫度的方法將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區(qū)分開， 使培養(yǎng)出來的菌主要為來自糞便中的大腸菌群， 從而更準確地反映出水質受糞便污染的情況 現(xiàn)階段袁糞大腸菌群檢測最常用的方法是多管發(fā)酵法和濾膜法。 但是這兩種方法測定的時間都很長袁至少需要 48 h，步驟繁瑣需要驗證試驗，同時無菌操作對實驗室硬件設施的要求 非常高。 而固定底物酶底物法分析 1 個樣品在實驗室內操作的時間僅需要 1 min培養(yǎng)時間也縮短為 24 h在普通實驗室內就能進行， 酶底物法能抑 制 200 萬個異樣細菌精確檢測到每 100 mL 樣品中的 1 個糞大腸菌群。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

主要儀器與試劑詳見表 1。

1.2 實驗原理

在培養(yǎng)溫度為 44.5依1益條件下袁糞大腸菌群細 菌 能 特 異 性 產 生 茁 一 半 乳 糖 苷 酶，該生物酶可以分解色原底物釋放色 原體使培養(yǎng)液呈黃色袁 使培養(yǎng)液呈黃色變化的原 理來測定水中糞大腸菌群。

1.3 實驗步驟

1 采用 100mL 無菌取樣瓶取 100mL 混勻水 樣 (如果水樣糞大腸菌群數(shù)大于2005 個/L則酌情少 取并用新配置的超純水稀釋至 100mL 刻度線)。 

2 在裝有水樣的取樣瓶中加入科立得 TM(Colilert余)試劑袁充分搖勻袁使試劑完全溶解。 

3 把溶解完全水樣倒入無菌培養(yǎng)定量盤(97孔)。

4 采用帶 97 孔定量盤橡膠托墊在封口機上 進行封裝。

5 把封裝好的 97 孔定量盤放人 44.5+1oC 恒 溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h。

6 培養(yǎng) 24h 后從培養(yǎng)箱中取出與 97 孔陽性標準比色盤進行比較黃色孔顏色比 97 孔陽性 標準比色盤深的表明為陽性反應根據(jù) 97 孔定量盤上的陽性孔數(shù) 對照 IDEXX 公司提供的 MPN表報出結果。

1.3 樣品來源

水樣來源于慶陽市蒲河地表水及巴家咀地表飲用水源水質袁 按照 葉地表水和污水監(jiān)測技術規(guī) HJ/T91-2002的規(guī)定采集并于 0耀4益低溫避 光保存6h 內進行分析測試。

 2 結果與討論

2.1 試驗結果
本次實驗各取慶陽市蒲河地表水和巴家咀飲 用水源水 30 份樣品分別用酶底物法和多管發(fā)酵 法進行監(jiān)測對比分析袁結果見表 2。

2.2 數(shù)據(jù)分析

運用軟件 Excel2007, 對 2 種方法監(jiān)測的糞大腸菌群結果進行配對 t 檢驗袁為了使 2 組數(shù)據(jù)呈正 態(tài)分布 現(xiàn)對數(shù)據(jù)進行對數(shù)處理后再進行 t 檢驗結果見表 3。

由表 3 可見泊松相關系數(shù)為 0.98堯0.994屬 強相關淵系數(shù)越趨于 1袁相關性直越好袁說明兩組 數(shù)據(jù)的相關性很好曰 P=0.426 和 0.725袁躍0.05袁說明 兩組數(shù)據(jù)無統(tǒng)計學意義上的顯著性差異可認為多管發(fā)酵法與酶底物法實驗結果具有可比性與 相關文獻相符具有較好的一致性。

2.3 討論

1 酶底物法與多管發(fā)酵法分別測定以慶陽 市境內的蒲河為代表的水樣中的糞大腸菌群兩 者沒有統(tǒng)計學意義上的差異遙 文中的分析結果與 相關參考文獻的結論有較好的一致性 。

2 酶底物法測定地表水中的糞大腸菌群袁操 作簡便監(jiān)測的時效性優(yōu)于傳統(tǒng)的分析方法袁監(jiān)測周期短前期準備工作少袁對實驗條件和人員要求 低袁能夠快速的監(jiān)測水質微生物污染程序袁滿足環(huán)境監(jiān)測技術要求。

3 酶底物法在美國堯歐洲及部分亞洲國家被廣泛應用于水中堯 糞大腸菌群及大腸埃希氏菌的檢測并通過美國 EPA 認證遙 中國也列入了葉生活 飲 用 水 標 準 檢 驗 方 法 微 生 物 指 標 曳 (GB 轅 T 5750援12要2006)袁可以測定生活飲用水中總大腸菌群和大腸埃希氏菌 廣東省質量技術監(jiān)督局于 2013 年批準發(fā)布了地方標準葉水中菌落總數(shù) 復合 酶底物檢測方法曳(DB44 轅 T 1163要2013)遙 酶底物法在國內正逐步開始推廣 但是由于該方法的成本較高袁目前還沒有被廣泛使用 如果將來試劑堯耗 材價格能有所下降 水樣的測定范圍能進一步提 高一定會得到更好的推廣。 

3 結論

固定底物酶底物法測定水樣中的糞大腸菌群具有較高的精密度和準確性袁與多管發(fā)酵法進 行比較在統(tǒng)計學意義上無顯著性差異 能滿足環(huán) 境監(jiān)測技術要求遙 該方法操作簡便堯快捷袁工作效 率得到了明顯提高袁適合批量分析水質類樣品建 議國家有關部門出臺水中糞大腸菌群酶底物分析方法。

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