應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法及分子對(duì)接技術(shù)探析逍遙散治療肝郁脾虛型抑郁癥、乳腺增生和功能性消化不良的作用機(jī)制，為中藥“異病同治”科學(xué)內(nèi)涵的詮釋提供理論依據(jù)。利用中藥數(shù)據(jù)庫(kù)（traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform, TCMSP）獲取和篩選逍遙散的活性成分，并將其與現(xiàn)有治療上述3種疾病的藥物進(jìn)行主成分分析（principal component analysis, PCA）判斷其生物活性；并結(jié)合Genecard數(shù)據(jù)庫(kù)、TTD數(shù)據(jù)庫(kù)、CTD數(shù)據(jù)庫(kù)和DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)獲取疾病靶點(diǎn)得到逍遙散治療抑郁癥、乳腺增生和功能性消化不良的作用靶點(diǎn)。

采用Cytoscape軟件繪制逍遙散“異病同治”的“單味藥-活性成分-共同靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖尋找核心靶點(diǎn)，對(duì)共有靶點(diǎn)進(jìn)行kyoto encyclopedia of genes and genomes（KEGG）通路分析和gene ontology（GO）富集分析。該研究收集得到逍遙散活性成分121個(gè)，逍遙散“異病同治”共有靶點(diǎn)38個(gè)，關(guān)鍵生物通路包括糖尿病并發(fā)癥中的advanced glycation and products（AGEs）-receptor for advanced glycation and products（RAGE）信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路以及癌癥相關(guān)通路等。逍遙散“異病同治”抑郁癥、乳腺增生和功能性消化不良的關(guān)鍵靶點(diǎn)為IL-6、IL-4和TNF等，關(guān)鍵活性成分有山柰酚、槲皮素和蘆薈大黃素等。最后，分子對(duì)接結(jié)果表明，關(guān)鍵活性成分與靶點(diǎn)之間具有很強(qiáng)的親和力，驗(yàn)證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

逍遙散治療肝郁脾虛型疾病可能是通過減少炎癥反應(yīng)發(fā)揮作用。研究結(jié)果為闡釋中藥復(fù)方“異病同治”科學(xué)內(nèi)涵提供了新的思路與方法，也將為深入了解逍遙散效應(yīng)機(jī)制、探索其新的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

“異病同治”始于《黃帝內(nèi)經(jīng)》，確立于《傷寒雜病論》，在臨床診斷及治療中發(fā)揮著重要的指導(dǎo)作用。“異病同治”是指不同疾病，在其發(fā)展過程中，由于出現(xiàn)了相同病機(jī)，因而可采用同一種治療的法則。這一理論基礎(chǔ)是“證同治亦同”，而證則是最終選擇治療方法的關(guān)鍵點(diǎn)。“異病同治”也體現(xiàn)了中藥及其方劑多成分、多靶點(diǎn)、多途徑的作用特點(diǎn)。“異病同治”科學(xué)內(nèi)涵的闡釋是中藥現(xiàn)代化的重要內(nèi)容之一。

抑郁癥、乳腺增生和功能性消化不良是臨床常見疾病。這三種疾病最常見的中醫(yī)證候?yàn)楦斡羝⑻撟C。首先，肝主疏泄，主藏血；脾主運(yùn)化，主生血和統(tǒng)血，兩者共主氣機(jī)運(yùn)行。若情志不遂，久郁傷肝，憂思?xì)饨Y(jié)，氣機(jī)凝滯，阻滯于乳絡(luò)，引發(fā)乳房疼痛；脾主運(yùn)化，主統(tǒng)血，若思慮過尤，導(dǎo)致肝脾兩傷，運(yùn)化失司，脾不統(tǒng)血，血溢脈外而成瘀。再者，脾氣虛弱則不能運(yùn)化水谷，故出現(xiàn)食欲減退，可進(jìn)一步影響脾胃的納運(yùn)機(jī)能，進(jìn)而腹瀉、厭食；脾主升清，將水谷精微上輸于心、腦等以榮養(yǎng)之，脾虛不能升清，故出現(xiàn)情緒低落、興趣缺乏等大腦能量低下癥狀。由此可見，這3種疾病的發(fā)生、發(fā)展相互關(guān)聯(lián)、相互影響。但目前尚未見對(duì)這3種疾病的共同發(fā)病機(jī)制以及藥物“異病同治”的作用機(jī)制的研究報(bào)道。

經(jīng)典名方逍遙散出自《太平惠民和劑局方》，由柴胡、白術(shù)、白芍、薄荷、當(dāng)歸、茯苓、甘草和生姜8味藥組成，具有疏肝解郁、養(yǎng)血柔肝止痛之功效，主治肝郁血虛而致兩肋作痛，頭痛目眩，口燥咽干，神疲食少，乳房作脹，脈弦而虛者?，F(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)和臨床研究表明，逍遙散在治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)（如抑郁癥）、消化系統(tǒng)（如功能性消化不良）、婦科（如乳腺增生）、內(nèi)科等疾病上均有確切的療效 ，體現(xiàn)了該方“異病同治”的特點(diǎn)。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是在系統(tǒng)生物學(xué)與多向藥理學(xué)的基礎(chǔ)上提出的一種新思想、新策略，以中藥成分、靶點(diǎn)與疾病間相互作用的整體性和系統(tǒng)性為切入點(diǎn)，系統(tǒng)地觀察藥物的作用機(jī)制?；谥兴帞?shù)據(jù)庫(kù)、靶標(biāo)預(yù)測(cè)技術(shù)、網(wǎng)絡(luò)分析平臺(tái)的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究模式與中藥及其復(fù)方的作用特點(diǎn)相符合，有助于中藥 “異病同治”科學(xué)內(nèi)涵的闡釋。

本研究應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法研究抑郁癥、乳腺增生和功能性消化不良等3種疾病的發(fā)病機(jī)制，以及逍遙散“異病同治”的作用機(jī)制。首先，通過PCA分析判斷逍遙散化學(xué)成分的生物活性。然后，構(gòu)建“單味藥-活性成分-共有靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，尋找逍遙散“異病同治”的關(guān)鍵活性成分和靶點(diǎn)，并對(duì)其進(jìn)行KEGG通路富集分析和GO富集分析。最后，將關(guān)鍵活性成分與對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證。研究結(jié)果將為中藥復(fù)方“異病同治”科學(xué)內(nèi)涵的詮釋提供新的研究思路與方法，也將為深入了解逍遙散效應(yīng)機(jī)制，探索其新的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 數(shù)據(jù)庫(kù)及軟件

中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和分析平臺(tái)TCMSP（http://lsp.nwu.edu.cn./tcmsp.php）；Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)（http://www.uniprot.org/）；GeneCards（https://genecards.weizmann.ac.il/v3/）數(shù)據(jù)庫(kù)；TTD（http://bidd.nus.edu.sg/group/cjttd/）數(shù)據(jù)庫(kù)；CTD（http://ctdbase.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)；DrugBank（https://www.drugbank.ca/）數(shù)據(jù)庫(kù)；Metascape （https://metascape.org/gp/index.html#/main/step1）數(shù)據(jù)庫(kù)；Cytoscape 3.7.1軟件；PubChem（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pccompound）數(shù)據(jù)庫(kù)；Autodock 軟件；PyMOL 軟件。

1.2 逍遙散化學(xué)成分及靶點(diǎn)的搜尋

運(yùn)用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和分析平臺(tái)TCMSP收集逍遙散方中8味藥—白芍、白術(shù)、薄荷、柴胡、甘草、茯苓、當(dāng)歸和生姜的化學(xué)成分，同時(shí)參考文獻(xiàn)查找逍遙散的化學(xué)成分。根據(jù)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中藥物動(dòng)力學(xué)（absorption and distribution and metabolism and excretion, ADME）參數(shù)，以口服生物利用度（oral bioavailability, OB）≥30%和類藥性指數(shù)（drug like index, DL）≥0.18為條件 ，對(duì)收集的化學(xué)成分進(jìn)行篩選，并記錄候選活性成分的分子量（molecular weight，MW）、辛醇-水比例（A log P）、血腦屏障（blood-brain barrier，BBB）以及Caco-2細(xì)胞滲透性（Caco-2）參數(shù)，以便于后續(xù)分析。利用TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)檢索候選活性成分的靶點(diǎn)，將整理搜集到的靶點(diǎn)導(dǎo)入U(xiǎn)niprot數(shù)據(jù)庫(kù)（http://www.uniprot.org/）對(duì)搜集篩選得到的靶點(diǎn)蛋白與基因進(jìn)行篩選和校正，選擇物種為“human”，剔除非人源靶點(diǎn)，并將所有的基因校正為其官方名稱（office gene symbol）。

1.3 候選化學(xué)成分的活性評(píng)價(jià)

記錄候選活性成分的MW、AlogP、BBB以及CaCo-2參數(shù)。利用DrugBank（https://www.drugbank.ca/）數(shù)據(jù)庫(kù)查找現(xiàn)有的治療抑郁癥、乳腺增生和功能性消化不良的藥物，并記錄每一個(gè)藥物的MW、AlogP、BBB以及Caco-2。將搜尋到的逍遙散的活性成分與現(xiàn)有的治療抑郁癥、乳腺增生和功能性消化不良的藥物進(jìn)行主成分分析PCA分析，預(yù)測(cè)逍遙散化學(xué)成分的類藥性。

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