一、分析意義

維生素廣泛存在于各種生物體中，其種類繁多，化學(xué)結(jié)構(gòu)與生理功能各異。因此無(wú)法按照結(jié)構(gòu)或功能分類，按其溶解性可分為脂溶性(V_A、V_D、V_E、V_K)和水溶性(V_B1、V_B2、V_B6 、V_B12、 V_P、V_PP、 V_C)兩大類。維生素是人體生命活動(dòng)不可缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，它們一般在動(dòng)物和人體內(nèi)不能合成或合成數(shù)量少，滿足不了動(dòng)物和人體的需要，必須依靠從食物中攝取。在食物中缺乏了任何一種維生素，人和動(dòng)物都會(huì)發(fā)生特有的缺乏癥狀，如缺乏維生素A,B和C時(shí)，可分別引起夜盲癥、腳氣和壞血病等，嚴(yán)重時(shí)足以致命。某些維生素含量的高低，是評(píng)價(jià)農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。

二、方法選擇的依據(jù)

測(cè)定維生素是一項(xiàng)比較復(fù)雜的工作。一般測(cè)定程序是:①用酸、堿或酶分解試樣，使其中的維生素游離出來(lái);②用溶劑進(jìn)行提取;③分離干擾物質(zhì)，對(duì)樣液進(jìn)行分離提純;④用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行定量等。測(cè)定維生家的方法有微生物學(xué)測(cè)定法、生物學(xué)測(cè)定法等;儀器分析的方法有分光光度法、熒光分析法、薄層層析法、高效液相色譜法等。選用方法時(shí)應(yīng)根據(jù)試樣的品種、類型、待測(cè)維生素的性質(zhì)、含量以及干擾物質(zhì)多少等因素來(lái)決定。下面主要介紹維生素C的測(cè)定。

維生素C又稱抗壞血酸，其純品為白色無(wú)臭結(jié)晶，熔點(diǎn)為190^oC～192^oC,溶于水或乙醇中，不溶于油劑，在水溶液中易被氧化，在堿性條件下易分解，在弱酸條件下較穩(wěn)定。還原型(L-抗壞血酸)可被氧化為氧化型(L-脫氫抗壞血酸)，但仍有一定的生理作用，如果進(jìn)一步水解則生成2,3-二酮古樂(lè)糖酸，便失去生理作用。通常所說(shuō)的總抗壞血酸包括還原型、氧化型抗壞血酸和2,3-二酮古樂(lè)糖酸。

測(cè)定Vc含量的方法有2,6-二氯靛酚法、2,4-二硝基苯肼法、鉛-硫化氫法、碘量法、以及熒光分光光度法。2,6-二氯靛酚法用于測(cè)定還原型Vc，其它方法多用于測(cè)定總Vc的含量。

三、還原型維生案C的測(cè)定((2,6-二氯靛酚滴定法)

1、方法原理

還原型抗壞血酸的分子中有烯二醇結(jié)構(gòu)（ ）存在，因此具有還原性，它能將藍(lán)色染料2，6-二氯靛酚還原為無(wú)色的化合物，而Vc則被氧化為脫氫Vc，反應(yīng)式如下：

2,6-二氯靛酚具有酸堿指示及氧化還原指示的兩種特性，在堿性介質(zhì)中呈深藍(lán)色，而在酸性介質(zhì)中呈淺紅色(變色范圍pH4～pH5)，其于氧化態(tài)時(shí)呈深藍(lán)色(堿介質(zhì)中)或淺紅色(酸性介質(zhì))，還原態(tài)時(shí)為無(wú)色。根據(jù)這個(gè)特性，用堿性藍(lán)色染料的標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定植物樣品酸性浸出液中Vc到剛變淺紅色為終點(diǎn)，由染料的用量即可計(jì)算Vc的含量。滴定終點(diǎn)的紅色是剛過(guò)量的未被還原的（氧化型）染料溶液在酸性介質(zhì)中的顏色。

通常，人們?cè)诮岷蜏y(cè)定Vc都是在草酸溶液〔p(H₂C₂O₄·2H₂O)=20g·L^-1]中進(jìn)行的，目的是保持反應(yīng)時(shí)一定的酸度，避免Vc在高pH時(shí)被空氣氧化。由于此染料不能氧化待測(cè)液中非Vc的還原性物質(zhì)，所以，對(duì)Vc有一定的選擇性。

本法適用于測(cè)定一般水果、蔬菜樣品的還原型Vc(不包括脫氫Vc)。如試樣中含有Fe ²⁺,

Sn²⁺,Cu²⁺,SO₃^2-、S₂O₃^2-、SO₂等還原性雜質(zhì)，則有干擾。

2、主要儀器

高速組織搗碎機(jī)(8000r·min^-1～12000r·min^-1);電動(dòng)離心機(jī)(4000r·min^-1);半微量滴定管。

3、試劑

（1）草酸溶液［p(H₂C₂O₄·2H₂O)=20g·L^-1］:稱取草酸(H₂C₂0₄·2H₂0，化學(xué)純)20g溶于水中，稀釋至1L,貯于避光處；

（2）碘化鉀溶液〔p(KI)=60g·L^-1]:60g碘化鉀(KI，化學(xué)純)溶于水，稀釋至1L;

（3）淀粉指示劑:lg可溶性淀粉溶于100mL沸水中;

（4）碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)液[c(K10₃)=0.001mol·L^-1]:稱取在105^oC供過(guò)2h的碘酸鉀(KIO₃，優(yōu)級(jí)純)1.784g溶于水，定容至500mL。此為 貯備液。使用時(shí)將此貯備液用煮沸并冷卻的水稀釋100倍。即成標(biāo)準(zhǔn)溶液。大約線星期應(yīng)稀釋配制一次；

（5） Vc標(biāo)準(zhǔn)溶液:稱取Vc(C₆H₈O₆，分析純)0.020g溶于草酸溶液中(試劑1)，并用草酸稀釋至100mL，此液約含Vc0.2g·L^-1，置于冰箱中保存。臨用當(dāng)天進(jìn)行標(biāo)定。

Vc的標(biāo)定:吸取Vc液5.00mL于50mL三角瓶中，加入草酸溶液(試劑1)10mL,碘化鉀溶液(試劑2)0.5mL,淀粉指示劑5滴，用碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)液(試劑4)滴定至溶液突變?yōu)闇\藍(lán)色為止(約需滴定11mL)，計(jì)算Vc的準(zhǔn)確濃度:

式中:p(C₆H₈O₆)——標(biāo)定出的Vc標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，g·L^-1；

c——碘酸鉀溶液物質(zhì)的的濃度( KIO₃,mol·L^-1);

V₁——所用磺酸鉀溶液的體積，mL;

V₂——吸取Vc溶液的體積,mL;

6.2,6-二氯靛酚溶液:稱取2,6-二氯靛酚(C₁₂H₇NO₂C1₂，分析純)0.050mg溶于約200mL含有碳酸氫鈉(NaHCO₃，分析純0.052mg的溫水中(＜40^OC)，冷卻后用水稀釋至250mL。用玻璃濾器或折疊濾紙過(guò)濾于棕色瓶中，保存在冰箱中。使用前，待溶液恢復(fù)至室溫后，用Vc標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定其準(zhǔn)確濃度。在冰箱中保存時(shí)，每周標(biāo)定一次。

標(biāo)定方法:吸取已標(biāo)定的Vc標(biāo)準(zhǔn)溶液5.00mL(含Vc約1mg)于50mL三角瓶中，加入草酸溶液10mL，搖勻，用2,6-二氯靛酚溶液滴定至溶液呈淺紅色，約在15s不褪色為止（約約0.1mgVc·mL^-1）:

式中:P——所用Vc標(biāo)準(zhǔn)液的濃度(mg/mL);

V₁——吸取Vc標(biāo)準(zhǔn)液的mL數(shù)。

V₂——所用2,6-二氯靛酚溶液的mL數(shù)。

參考資料：土壤農(nóng)業(yè)化學(xué)分析方法