6、山楂紅色素的成分分析

本試驗(yàn)采用超高壓液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測(cè)定山楂紅色素的成分。用單因素及響應(yīng)面確定的最優(yōu)條件提取山楂紅色素，在4500r/min條件下離心兩次，每次5min，過(guò)0.45μm的微孔濾膜，得到樣品。

色譜條件：EclipsePlusCl8柱(2.1×50mm×1.89m)；流動(dòng)相：A0.1％甲酸水溶液；B乙腈；梯度程序：0～2.5min，82％A，18％B；7.5min，65％A，35％B；11min，35％A，65％B；12min，0％A，100％B；13min，0％A，100％B；13.5min，95％A，5％B；15min，95％A，5％B；流速：0.3mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：520nm。

二、結(jié)果與分析

1、單因素試驗(yàn)結(jié)果

（1）離子液體用量對(duì)山楂紅色素含量的影響

由圖1可知，離子液體用量在0％～15％內(nèi)，離子液體用量與吸光度呈現(xiàn)正相關(guān)，直到用量達(dá)到15％時(shí)，吸光度達(dá)到最大值0.41；之后，吸光度隨著離子液體用量的增加而降低。由圖顯示可知，離子液體用量為總體積的15％為最適宜。離子液體用量在0％～15％內(nèi)，因?yàn)殡x子液體含量占比相對(duì)較低，濃度也低，因此提取劑的黏度較低，對(duì)山楂紅色素有很大的提取力；隨著用量的增加，而且[BMIM]pH6為疏水性離子液體，而山楂紅色素是親水性的，易溶于乙醇。離子液體[BMIM]pH6含量越高，疏水性越強(qiáng)，會(huì)增加提取劑的黏度，從而減小山楂紅色素的擴(kuò)散能力，進(jìn)而導(dǎo)致吸光度下降。

（2）液料比對(duì)山楂紅色素提取的影響

由圖2可知，隨著液料比的增大，吸光度呈減小趨勢(shì)。即隨著液料比的增大，山楂紅色素的提取量逐漸降低，由此可知，采用一次提取方法，液料比為4:1時(shí)的吸光度值為0.42，比液料比為5:1時(shí)吸光度值0.37，提取率高出14％，故選擇本試驗(yàn)最適液料比為4:1。

（3）提取時(shí)間對(duì)山楂紅色素提取的影響

由圖3可知，吸光度隨著提取時(shí)間的增加而增大，直到50min時(shí)達(dá)到最大值0.55，之后，吸光度卻有所下降。山楂紅色素穩(wěn)定性較差，50min后山楂紅色素可能受到破壞，因此吸光度有所下降。由圖表顯示的結(jié)果知，山楂紅色素含量的最適提取時(shí)間為50min。
（4）溶液pH對(duì)山楂紅色素提取的影響
由圖4可知，隨著pH的增大，吸光度隨著pH的增大呈現(xiàn)減小的趨勢(shì)，當(dāng)pH為1時(shí)，吸光度有最大值0.78。當(dāng)pH為1～2時(shí)，山楂紅色素的吸光度降低幅度較大，當(dāng)pH為2～6時(shí)，山楂紅色素的吸光度變化幅度逐漸減小，說(shuō)明山楂紅色素在酸性條件下有較高的穩(wěn)定性，并且酸性越強(qiáng)越有利于花色苷的提取，pH為1的時(shí)候提取效果最好。王旭等通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化黑玉米籽粒中花色苷的提取工藝也得到了類(lèi)似的結(jié)果。

（5）提取溫度對(duì)山楂紅色素提取的影響

由圖5可知，吸光度隨著溫度的升高而增大，溫度在45℃～60。C之間的吸光度基本持平，60℃之后的吸光度卻又急劇升高?？赡苁且?yàn)楦邷囟认码x子液體提取的不光是紅色素還有果膠，而且張晨等研究得到果膠的最適提取溫度為95℃，說(shuō)明高溫下確實(shí)有果膠的溶出，從而導(dǎo)致吸光度增大。由此可知，最適的萃取溫度應(yīng)在45℃～60℃之間。

2、Plackett-Burman試驗(yàn)

根據(jù)表1的設(shè)計(jì)，利用Minitab軟件安排試驗(yàn)方案，并按2.3的單因素試驗(yàn)方法進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

利用Minitab軟件對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，結(jié)果如下表3。回歸模型誤差的標(biāo)準(zhǔn)方差為0.0272，回歸方程的系數(shù)R²為0.9862，其預(yù)測(cè)值為0.8758，調(diào)整后的系數(shù)R2為0.9620。

從以上設(shè)計(jì)分析的檢驗(yàn)結(jié)果可以看出：主效應(yīng)中，因素B(液料比)、因素D(提取時(shí)間)及因素E(pH)效應(yīng)顯著，其P值分別為0.000，O.026和0.000，均小于0.05，因此能夠作為下一步優(yōu)化的因素。其他因素的P值皆大于0.05，對(duì)結(jié)果影響不明顯，在之后試驗(yàn)中，不作為主要因素進(jìn)行研究。取離子液體用量、液料比、提取溫度三因素進(jìn)行優(yōu)化。

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