2.4 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

與GC-MS相似，HPLC-MS技術(shù)是將高效液相色譜法與質(zhì)譜法相結(jié)合，拓寬了高效液相色譜法的檢測范圍，是一種集高分理性、高選擇性和高靈敏度于一體的檢測方法。HPLC-MS可用于測定GC-MS難以區(qū)分的物質(zhì)，如DINP和鄰苯二甲酸二異癸酯(di-iso-decyl phthalate，DIDP)具有多種同分異構(gòu)體，在GC和GC-MS的色譜圖中為五指峰，不容易準確定量。徐敦明等采用HPLC-MS進行測定時，DINP只有一個峰，易于實現(xiàn)定量檢測。

此外，HPLC-MS亦適用于多種PAEs的高通量測定，邵秋榮等利用HPLC-MS法測定了酒中23種PAEs的殘留量，檢出限為0.1 mg/kg，遠低于國家限量標準。23種PAEs的加標回收率為87～102%，證明了采用HPLC-MS技術(shù)對食品中PAEs多殘留檢測的可行性。HPLC-MS方法靈敏度高，定性定量準確，近年來在痕量有機物的檢測中應(yīng)用越來越廣泛，但是HPLC-MS方法仍然存在HPLC檢測法中操作復(fù)雜的缺點，同時其所用設(shè)備昂貴，在食品污染物的檢測應(yīng)用中受限。

2.5 傅立葉變換紅外光譜法

除了有上述檢測方法之外，傅立葉變化紅外光譜法也被應(yīng)用于PAEs的檢測。傅立葉變化紅外光譜具有分辨率高、檢測快速等優(yōu)點，在有機化學(xué)、無機化學(xué)、材料科學(xué)、醫(yī)藥和環(huán)境等領(lǐng)域有較多應(yīng)用。俞雄飛等[31]利用傅立葉變換紅外光譜對PAEs進行了快速鑒定。該方法的不足之處在于靈敏度較低、基體干擾較大，需要對樣品進行較高的分離提純，因此在食品中污染物的檢測中應(yīng)用較少。

3 快速檢測法

大型儀器檢測法在食品中PAEs的檢測中表現(xiàn)出靈敏、快速、準確等優(yōu)點，但仍存在很多不可避免的問題，包括樣品前處理復(fù)雜、儀器昂貴、需要專業(yè)人員操作、有機溶劑用量大等，無法滿足對食品中PAEs實時原位快速檢測的迫切需求。因此快速檢測技術(shù)應(yīng)運而生，主要有免疫檢測法、熒光法、電化學(xué)檢測法、表面增強拉曼光譜法(surface-enhanced Raman spectroscopy，SERS)等。

3.1 免疫檢測法

免疫檢測法是利用抗原與抗體的特異性識別能力對目標分子進行快速的定性、定量分析。根據(jù)檢測模式、載體和標記物的不同，免疫檢測技術(shù)可分為酶聯(lián)免疫分析法、聚合酶鏈式反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)免疫分析法、免疫親和層析分析法等。酶聯(lián)免疫法是研究最多的PAEs免疫分析法，SUN等制備了生物素化的DBP多克隆抗體，建立了一種高靈敏的DBP生物素-鏈酶親和素酶聯(lián)免疫檢測法，該方法對DBP具有很高的檢測特異性(<4%)，檢測濃度范圍為0.45～7.06 mg/L，檢測限為5 ng/L，對飲料和飲用水中的檢測回收率在89.5%～109.5%之間。

ZHANG等提出了一種新型的競爭性酶聯(lián)免疫吸附法來檢測DBP，該方法基于溶解的Ag+對牛血清白蛋白催化的抑制作用來提高檢測靈敏度，降低DBP的檢測限，比常規(guī)的酶聯(lián)免疫吸附試驗降低了16倍。相對于其他免疫檢測技術(shù)，PCR分析法具有較低的檢出限和較高的靈敏度，SUN等建立一種超靈敏的高通量免疫PCR分析方法，用于對食品中鄰苯二甲酸二乙酯(diethyl phthalate，DEP)的快速實時檢測。研究者將免疫方法與PCR技術(shù)相結(jié)合，大大提升了對DEP的檢測能力，其檢測濃度范圍達到4 pg/L～40 ng/L，檢出限為1.06 pg/L，該工作為食品中痕量PAEs的測定提供了方法學(xué)借鑒。免疫親和層析技術(shù)是發(fā)展較為成熟的免疫檢測技術(shù)，現(xiàn)已有基于免疫親和層析技術(shù)的PAEs檢測卡的商業(yè)化生產(chǎn)。

免疫檢測技術(shù)的抗干擾能力較差，易出現(xiàn)假陽性結(jié)果，其核心試劑抗體屬蛋白類物質(zhì)，易受溫度、PH等的影響而失活。

3.2 熒光法

熒光法的原理是利用羥基自由基進攻PAEs，使其轉(zhuǎn)變成具有熒光性的羥基鄰苯二甲酸納，通過對熒光強度的測定可間接得到PAEs的含量。此外，可引入外源熒光材料，通過信號轉(zhuǎn)換實現(xiàn)PAEs的測定。KIM等以Po Po3為外源熒光材料，構(gòu)建對多種PAEs(鄰苯二甲酸二甲酯(dimethylphthalate，DMP)、DEP、DBP、DIBP、BBP、DEHP等)快速檢出的適配子熒光傳感器，可在30 s內(nèi)完成對目標分子的定量測試。在對實際樣品的檢測中，得到了與GC-MS相關(guān)媲美的檢測結(jié)果。WANG等報道了一種利用氨基核酸適配子修飾碳量子點的DBP熒光檢測方法，該方法在對酒中DBP的高選擇性和高靈敏檢測中得到了成功應(yīng)用，其檢測回收率為93.2%～112.4%。在對痕量PAEs的測定中，常將熒光檢測方法與免疫檢測法相結(jié)合，以提高檢測準確性和靈敏度。

CUI等成功合成了含氨基的鄰苯二甲酸二異丁酯(diisobutyl phthalate，DIBP)半抗原，并制備了抗鄰苯二甲酸-牛血清白蛋白的多克隆抗體。以該多克隆抗體為基礎(chǔ)，首次建立了一種快速、靈敏的間接競爭性熒光免疫分析法用以檢測食用油樣品中的DIBP。其檢測濃度范圍為10.47～357.06 mg/L，檢出限為5.82 mg/L，交叉反應(yīng)率小于1.5。ZHANG等開發(fā)了一種高靈敏的競爭性間接熒光免疫分析法，用以實現(xiàn)對鄰苯二甲酸二己酯(dicyclohexyl phthalate，DCHP)的特異性檢測。該方法以異硫氰酸熒光素為熒光標記物，結(jié)合DCHP兔源多克隆抗體建立了DCHP的熒光免疫分析法，達到了0.1～200 mg/L的檢測范圍和0.05 mg/L的檢測限。

采用熒光檢測法對非熒光性物質(zhì)進行檢測時，常常涉及熒光物質(zhì)的修飾，操作步驟較為繁瑣，成本較高。此外，熒光檢測結(jié)果難以長期保存。

3.3 電化學(xué)檢測法

電化學(xué)檢測法是現(xiàn)今發(fā)展最快速的食品安全檢測技術(shù)之一，是一種根據(jù)待檢溶液中物質(zhì)的電化學(xué)性質(zhì)及其變化規(guī)律對物質(zhì)組分進行定性和定量檢測的儀器分析手段，具有檢測快速、成本低廉、操作簡單、靈敏度高、選擇性好、便于實現(xiàn)對液態(tài)樣品的實時原位檢測等諸多優(yōu)點。根據(jù)電極識別元件的不同，電化學(xué)傳感器可分為適配體電化學(xué)傳感器、分子印跡電化學(xué)傳感器、電化學(xué)免疫傳感器、納米材料電化學(xué)傳感器等。WU等采用指數(shù)富集配體進化技術(shù)篩選了對DBP特異性結(jié)合的適配體，以適配體為DBP捕獲元件，進一步構(gòu)建了DBP的電化學(xué)適配體傳感器，實現(xiàn)了對DBP的選擇性高靈敏檢出，為塑化劑適配體的篩選和選擇性檢測提供了新的方法。

陶強等以DINP為檢測目標物，制備了DINP分子印跡聚合物，將之修飾于玻碳電極表面得到了可對DINP選擇性高靈敏檢出的分子印跡電化學(xué)傳感器。該傳感器可直接用于市售白酒樣品中DINP的現(xiàn)場檢測，無需樣品前處理，其檢測濃度范圍為50 nmol/L～1μmol/L，檢測限為27 nmol/L。適配體、分子印跡聚合物作為識別或富集元件在電化學(xué)檢測中具有其局限性，如適配體的修飾和分子印跡聚合物的低導(dǎo)電性等。對PAEs具有選擇性催化能力的功能納米材料常代替上述識別材料或與其相集合，用于對食品中PAEs的快速檢測。XIAO等構(gòu)建了一種以二茂鐵樹枝狀聚合物-氧化石墨烯修飾玻碳電極的鄰苯二甲酸二(2-甲氧基)酯(dimethoxyethyl phthalate，DMEP)電化學(xué)傳感器。其中，樹枝狀高分子結(jié)構(gòu)為氧化石墨烯的負載提供了致密的基底，氧化石墨烯為二茂鐵樹枝狀聚合物氧化還原探針的沉積提供了大的比表面積，并提高了復(fù)合材料的導(dǎo)電性。

該傳感器依托優(yōu)異的納米材料實現(xiàn)了對白酒中DMEP的成功檢測，檢測范圍為0.06～1200μmol/L，最低檢出限為0.04 mol/L。LIANG等研制了一種新型的簡單、無標記的DBP電化學(xué)阻抗免疫傳感器，該傳感器的檢出限較低(7μg/L)，選擇性較高，抗環(huán)境干擾能力較強，具有對實際樣品進行實時原位檢測的潛力。然而，如上文免疫檢測法所述，酶的穩(wěn)定性較低，易失活。

電化學(xué)檢測技術(shù)具有原位檢測的優(yōu)點，但僅適用于液態(tài)樣品，且要求樣品具有良好的導(dǎo)電性。開發(fā)新的電極材料與電極形式，提高電化學(xué)檢測的穩(wěn)定性和抗干擾能力是實現(xiàn)食品中PAEs快速原位檢測的有效途徑。

3.4 表面增強拉曼光譜法

SERS屬于分子振動光譜，可反映分子的特征結(jié)構(gòu)，具有對目標分子選擇性識別的作用，被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境檢測、化學(xué)成分分析、生物化學(xué)傳感、疾病診斷等研究領(lǐng)域。SERS檢測條件溫和、操作簡單且無需樣品前處理，具有原位快速檢測的潛力，受到國內(nèi)外研究者的廣泛關(guān)注。金屬元素金、銀、鉑、銣等對SERS具有顯著的增強效果，常被用于對食品中PAEs的SERS檢測。周亞茹等利用液-液自組裝技術(shù)制備了金納米三棱柱，其在乙醇與正己烷之間緊密排列形成膜狀結(jié)構(gòu)，再以硅片為其載體可制備便攜式SERS基底，該基底對BBP和DEHP均達到了較低的檢出限，分別為0.1 mg/kg和0.05 mg/kg。

利用該SERS基底成功實現(xiàn)了對酒中BBP的檢出。王欣如等以金納米三角片為模板制備了金-銀核層納米結(jié)構(gòu)(Au@Ag納米三棱錐)，并以該材料為SERS活性基底，結(jié)晶紫為探針，實現(xiàn)了對酒中BBP和DEHP的高靈敏檢測，檢測限分別為1 nmol/L和100 nmol/L。胡小燕等采用液-液界面自組裝技術(shù)，制備了金納米棒二維SERS基底膜(2D-SERS)，并以結(jié)晶紫為探針分子對所構(gòu)建的2D-SERS進行了測試，結(jié)果表明其對BBP的檢測具有良好的重現(xiàn)性和較高的靈敏度，檢測限可達50 nmol/L，該方法被成功應(yīng)用于市售白酒中中毒劑量BBP的檢測，表現(xiàn)出潛在的實際中應(yīng)用性。拉曼散射強度容易受光學(xué)系統(tǒng)參數(shù)等因素的影響，且易出現(xiàn)不同振動峰重疊的現(xiàn)象，影響測試準確性。

4 食品中PAEs檢測的難點

盡管食品中PAEs的檢測技術(shù)已有大量報道，如何實現(xiàn)PAEs的高效監(jiān)控，保障食品安全仍然面臨諸多挑戰(zhàn)：

樣品前處理工作復(fù)雜，無法實現(xiàn)大批量、現(xiàn)場快速檢測。

快速檢測技術(shù)有待加強。不僅要提高快速檢測方法的靈敏度，還應(yīng)該擴大快速檢測方法的應(yīng)用范圍。

食品中17種常見的PAEs的限量標準尚未公布，會影響實驗者對檢測結(jié)果的判定，也不利于市場監(jiān)管。因此合理制定限制PAEs的標準法規(guī)也是目前急需解決的問題。

5 結(jié)束語

食品中PAEs的有效監(jiān)控對防止食品污染，保障人們飲食安全具有重要的現(xiàn)實意義。本文對目前常用的食品中PAEs檢測技術(shù)進行了總結(jié)分析。傳統(tǒng)大型儀器檢測法具有檢測靈敏、準確度高的優(yōu)點，同時也存在設(shè)備昂貴、儀器操作復(fù)雜等不足之處；快速檢測技術(shù)具有檢測快速、成本低廉、適于原位檢測的優(yōu)點，也具有準確性低、適用范圍受限等缺點。食品種類繁多，不同種PAEs物理化學(xué)性質(zhì)亦有差異，根據(jù)不同的檢測需求靈活選擇合適的檢測方法，或者采用多種檢測技術(shù)相結(jié)合的方式是實現(xiàn)食品中PAEs高效檢測的有效手段。同時，發(fā)展更為完善的PAEs檢測新模式并加以推廣應(yīng)用將成為未來食品中PAEs檢測的主要發(fā)展方向。

聲明：本文所用圖片、文字來源《食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報》，版權(quán)歸原作者所有。如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請與本網(wǎng)聯(lián)系刪除

相關(guān)鏈接：PAEs，拉曼光譜，多克隆抗體