則待測(cè)物C引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

（2）試樣稱(chēng)量(m)產(chǎn)生的不確定度u（m）

稱(chēng)取5.00g試樣，所用天平的最大允許誤差為±0.1mg，按照矩形分布計(jì)算，由稱(chēng)量試樣引入的不確定度和相對(duì)不確定度分別為：

（3）待測(cè)液定容(V)產(chǎn)生的不確定度u(v)

樣品經(jīng)提取、凈化、氮?dú)獯蹈珊笥?00-1000μL移液器移取1.00mL流動(dòng)相溶解殘留物，則不確定度的計(jì)算如下：

①依據(jù)移液器校準(zhǔn)證書(shū)，當(dāng)k=2時(shí)，這種規(guī)格移液器的擴(kuò)展不確定度為，U(1000μL)=1.0μL，則其標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

②溫度引入的不確定度，流動(dòng)相的膨脹系數(shù)為4.62×10^-4/℃，實(shí)驗(yàn)室的溫度為20±5℃，按照均勻分布，k=根號(hào)÷3，則溫度差異引入的不確定度為：

（4）重復(fù)性測(cè)定引入的不確定度u(X_重)

對(duì)待測(cè)樣重復(fù)測(cè)定6次，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4，試樣液中4-己基間苯二酚平均含量為5.054μg／mL，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.052μg／mL，則樣品測(cè)定重復(fù)性帶來(lái)的不確定度：

相對(duì)不確定度為：

（5）加標(biāo)回收率引入的不確定度u(R)

稱(chēng)取六份空白基質(zhì)(鮮蝦)試樣于中50mL離心管中，分別向6只離心管中加入50μg／mL的4-己基間苯二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液100μL，根據(jù)DB33／3007-2015《食品中4-己基間苯二酚殘留量的測(cè)定》的要求：從原始樣品中取出代表性的樣品500g，去頭、去殼、去附肢，取可食部分。用組織搗碎機(jī)搗碎混勻，均分成兩份分別裝入到潔凈容器中作為試樣，密封并標(biāo)識(shí)。將試樣放入-18℃以下保存。稱(chēng)取59(精確到0.01g)樣品置于50mL離心管中，加入10mL乙腈二氯甲烷溶液(體積比：7:3)，高速組織搗碎機(jī)勻漿2min，蓋塞，旋渦混勻lmin，超聲提取10min，8500r／min離心5min，取上清液轉(zhuǎn)入100mL旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，重復(fù)上述操作一次。合并提取液于45℃旋發(fā)近干，取7.5mL二氯甲烷分三次超聲溶解，合并，待凈化。將上述待凈化液轉(zhuǎn)至固相萃取柱中。用6mL正己烷淋洗，將固相萃取小柱抽至近干，用6mL甲醇丙酮溶液(體積比：1:1)洗脫，收集洗脫液。洗脫液于50℃氮?dú)獯蹈?，殘留物?.0mL流動(dòng)相溶解，過(guò)0.22μm的有機(jī)相為空濾膜，供液相色譜測(cè)定。6次平行試驗(yàn)測(cè)得加標(biāo)回收率見(jiàn)表5。

加標(biāo)回收率引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

加標(biāo)回收率引入的相對(duì)不確定度：

3、合成不確定度

以上各不確定度分量相互獨(dú)立，不考慮分量間的相關(guān)性，則鮮蝦中4-己基間苯二酚測(cè)定結(jié)果合成不確定度為：

三、擴(kuò)展不確定度及結(jié)果表示

擴(kuò)展不確定度由合成不確定度乘以包含因子，試樣中4-己基間苯二酚：

在95%置信水平下，k=2,U=k·u_red（總）=0.094，試樣中4-已基間苯二酚的含量X=（1.01±0.094）mg/kg。

四、結(jié)論

通過(guò)高效液相色譜法測(cè)定鮮蝦中4-己基間苯二酚的含量，并對(duì)影響結(jié)果的不確定度各分量進(jìn)行分析。通過(guò)分析發(fā)現(xiàn)影響結(jié)果不確定度的因素中由待測(cè)物濃度和回收率產(chǎn)生的影響較大，重復(fù)性測(cè)定次之，樣品稱(chēng)量、待測(cè)液的定容引入的不確定度較小。因此在日常檢測(cè)中，可以通過(guò)使用更精確的移液器來(lái)減小標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)配制過(guò)程中產(chǎn)生的不確定度；可以多次測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)系列溶液各濃度點(diǎn)、以及依據(jù)樣品濃度調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)各濃度的大小來(lái)減小標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)擬合產(chǎn)生的不確定度，從而減小由待測(cè)物濃度引入的不確定度。此外，可通過(guò)嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)方法，熟練實(shí)驗(yàn)步驟，控制固相萃取小柱質(zhì)量等，減小由回收率帶來(lái)的不確定度。

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