3、線性關(guān)系考察

將分別精密量取的標準混合使用液0.1mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、2.5mL分別置5mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻即得標準系列1～5，線性6直接取精密量對照品儲備溶液中的日落黃、新紅0.4mL，糖精鈉、亮藍、誘惑紅、靛藍、胭脂紅、山梨酸、納他霉素各取1.0mL，赤蘚紅0.7mL，脫氫乙酸0.5mL，苯甲酸取0.03mL，富馬酸二甲酯取0.25mL置同一25mL容量瓶中，搖勻，加水稀釋至刻度。項下的標準系列按上述色譜條件進行測試，以峰面積為縱坐標，質(zhì)量濃度為橫坐標繪制標準線性，得到線性回歸方程以及相關(guān)系數(shù)r，結(jié)果見表3。

結(jié)果表明，糕點中13種成分的線性關(guān)系良好，檢測限以S/N=3進行計算，結(jié)果滿足要求。

4、回收率與精密度

分別稱取9份陰性樣品，各2.5g，按上述色譜條件以及優(yōu)化好的前處理方法，以低、中、高三個濃度水平進行添加標準混合儲備液為0.3mL、1.0mL、2.5mL，添加后濃度分別約為2.4μg/mL、8.0μg/mL、20μg/mL，按上述色譜條件以及優(yōu)化好的前處理方法，稱取粉碎均勻的糕點樣品2.5g置50mL離心管中，加25mL水，各加5mL106g/L亞鐵氰化鉀溶液和5mL219g/L乙酸鋅溶液，渦旋10min10min后取出，量取上清液5mL過QasisWAX固相萃取小柱（預(yù)先經(jīng)3mL甲醇以及3mL水活化），棄去流出液，依次用6mL2％甲酸和6mL純化水清洗，再用5％氨化甲醇洗脫并收集于15mL離心管中，在40℃水浴中氮吹至近干后取出放置室溫，用5mL水復(fù)溶殘渣，過0.45μmGHP微孔濾膜后，待測。結(jié)果見表4，結(jié)果表明，糕點中13種食品添加劑平均回收率為82.1％～105.4％，RSD為小于5％（n=9），說明本次試驗方法回收率與精密度良好。

5、實際樣品測定

將8個批次樣品分別精密量取上述精密量取精密稱取新紅、胭脂紅、亮藍、赤蘚紅、靛藍、日落黃、誘惑紅38.25mg、12.45mg、12.77mg、25.53mg、11.17mg、34.80mg、10.76mg分別置50mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，得到7種人工合成色素濃度分別為：0.6801mg/mL、0.2236mg/mL、0.2339mg/mL、0.4391mg/mL、0.2011mg/mL、0.6299mg/mL、0.1857mg/mL；又分別精密稱取脫氫乙酸、苯甲酸、山梨酸、納他霉素、對照品27.88mg、18.19mg、11.45mg、10.00mg、11.78mg分別置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得到4種防腐劑濃度分別為：0.5520mg/mL、0.3636mg/mL、0.2267mg/mL、0.1980mg/mL；精密稱取糖精鈉對照品11.78mg置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得到1種甜味劑濃度為：0.2356mg/mL；精密稱取富馬酸二甲酯對照品10.29mg置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得到濃度為1.0280mg/mL。

對照品儲備溶液中的日落黃、新紅0.4mL，糖精鈉、亮藍、誘惑紅、靛藍、胭脂紅、山梨酸、納他霉素各取1.0mL，赤蘚紅0.7mL，脫氫乙酸0.5mL，苯甲酸取0.03mL，富馬酸二甲酯取0.25mL置同一25mL容量瓶中，搖勻，加水稀釋至刻度。標準混合使用液0.1mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、2.5mL分別置5mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻即得標準系列1～5的標準混合使用液。結(jié)果8個批次中有5個批次檢出山甲酸、2個批次檢出苯甲酸，1個批次同時檢出新紅、山梨酸、靛藍、脫氫乙酸、胭脂紅，結(jié)果見圖3，檢出山梨酸的批次雖經(jīng)光譜確認為陽性，但含量均在國家規(guī)定的范圍內(nèi)（≤1.0g/kg），檢出苯甲酸的批次經(jīng)光譜確認為陰性，同樣也符合國家標準規(guī)定（不得檢出），檢出新紅、山梨酸、靛藍、脫氫乙酸、胭脂紅的批次光譜確認圖見圖4，光譜確認圖中可見只有山梨酸的樣品光譜圖與標準品的光譜圖一致，確認檢出山梨酸，含量為0.21g/kg，符合國家標準規(guī)定，針對檢出的樣品，本次試驗也采用國標進行驗證，結(jié)果與國標結(jié)果一致，說明本試驗方法可靠，值得推廣。

三、結(jié)論

本試驗建立了一種固相萃取一高效液相色譜法同時檢測糕點中13種食品添加劑的方法，本方法采用106g/L亞鐵氰化鉀和219g/L乙酸鋅作為蛋白沉淀劑去除樣品中存在干擾的蛋白基質(zhì)以及糖類等基質(zhì)，經(jīng)WatersOasisWAX固相萃取小柱進行富集、凈化，以Agilent5HC-C₁₈（2）（4.6×250mm，5μm）色譜柱進行分離，0.02mol/L乙酸銨和甲醇為流動相，梯度洗脫，PDA檢測器進行定性定量檢測，采用對照品光譜圖對樣品中假陽性樣品進行確認，判定結(jié)果是否有檢出。通過試驗，本方法線性關(guān)系良好，回收率高，精密好，是一種能夠快速并同時檢測糕點中13種食品添加劑的方法本方法為食品添加劑的檢測提供一定的數(shù)據(jù)支持。

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