油茶籽油，又名山茶油、茶油，其脂肪酸組成與“液體黃金”橄欖油尤為相似，其還富含角鯊烯、甾醇等三萜類化合物。三萜類化合物對人體的營養(yǎng)保健起著重要的作用，如具有降低血清膽固醇水平，預(yù)防心臟病及抗炎、抗癌等作用。目前，油茶籽油三萜類化合物研究大多集中在菜油甾醇、谷甾醇、豆甾醇等幾種常見甾醇，而對其他三萜類化合物并未深入研究。為關(guān)注油茶籽油精煉加工過程中三萜類化合物含量變化，本研究以正己烷為洗脫劑，采用中性氧化鋁柱層析提取分離不同精煉工序油茶籽油中三萜類化合物，并利用 GC － MS 測定不同精煉工序的油茶籽油中三萜類化合物含量，研究精煉過程對三萜類化合物含量的影響，對全面認(rèn)識油茶籽油的營養(yǎng)具有重要意義，并為后續(xù)開展油茶籽油適度精煉提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1． 1 實驗材料

1． 1． 1 原料與試劑

油茶籽浸出毛油及其脫酸油、脫色油、脫臭油、成品油，各 6 批次，由江西齊云山油茶科技有限公司提供。角鯊烯、膽甾烷醇、菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、 β － 谷甾醇、β － 香樹脂醇、羽扇豆醇、環(huán)阿屯醇、熊果醇、樺木醇、無水嘧啶，美國 Sigma 公司; 羊毛甾醇，美 國 Avanti 公司; 中性氧化鋁( 薄層用，F(xiàn)CP200 ～ 300 目) ; 氫氧化鉀、無水乙醇，分析純; 正己烷，色譜純，美 國 Honeywell 公司; 0．22 μm 濾膜，日本 Shimadzu 公 司; 99∶ 1 雙三甲基硅基三氟乙酰胺 － 三甲基氯硅烷( 99∶ 1 BSTFA －TMCS) ，美國 TCI 公司。 

1． 1． 2 儀器與設(shè)備

7890B + 7000D 氣相色譜 － 三重四級桿串接質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國安捷倫公司; QUINTIX124 － 1CN 電
子分析天平( 精度≤0． 1 mg) ，德國賽多利斯公司; HH － 6 電熱恒溫水浴鍋，上海博訊實業(yè)有限公司; Vortex Wizard 渦旋儀，意大利 VELP 公司; N － EVAP氮吹儀，美國 Organomation 公司; Ｒ － 100 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，瑞士 Buchi 公司; 層析柱、冷凝回流管、圓底燒瓶、玻璃試管，四川蜀玻有限公司。 

1． 2 實驗方法

1． 2． 1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

用丙酮分別配制 1 mg /mL 角鯊烯、菜籽甾醇、菜油甾醇、膽甾烷醇、豆甾醇、β － 谷甾醇、β － 香樹
脂醇、環(huán)阿屯醇、羽扇豆醇、熊果醇、羊毛甾醇、樺木醇母液。樣品測定時，根據(jù)油茶籽油中實際三萜類
化合物濃度，在各三萜類化合物線性范圍內(nèi)將母液配制成分別含有 0． 2、0． 5、1、2、5、10 μg /mL 豆甾醇、羽扇豆醇、樺木醇、熊果醇、菜籽甾醇、菜油甾醇，2、5、10、20、50、100 μg /mL 角 鯊 烯、β － 谷 甾醇、羊毛甾醇，10、25、50、100、250、500 μg /mL 環(huán)阿屯醇、β － 香樹脂醇 6 個梯度的不同質(zhì)量濃度混標(biāo)，混 標(biāo) 中 加 入 100 μL 內(nèi) 標(biāo) ( 1 mg /mL 膽 甾 烷醇) 。氮 吹 后 加 入 100 μL 硅 烷 化 試 劑 ( 99 ∶ 1 BSTFA － TMCS 和等體積無水嘧啶) 衍生試劑，室溫放置 15 min，加入 1 500 μL 正己烷稀釋，過 0． 22 μm 有機(jī)濾膜，進(jìn)氣相色譜 － 質(zhì)譜檢測。以目標(biāo)化合物質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 

1． 2． 2 GC － MS 條件

1． 2． 2． 1 GC 條件

HP － 5MS 色 譜 柱 ( 30 m × 0． 25 mm × 0． 25 μm) ; 載氣為氦氣，流速 0． 95 mL /min; 進(jìn)樣口溫度320 ℃，進(jìn)樣量 1 μL，不分流進(jìn)樣; 柱升溫程序為初始溫度 180 ℃，保持 1 min，以 4 ℃ /min 升到 300 ℃，保持 25 min; 溶劑延遲時間 20 min。 1． 2． 2． 2 MS 條件電子轟擊離子源，電子能量 70 eV，傳輸線溫度300 ℃，離子 源 溫 度 250 ℃，質(zhì) 量 掃 描 范 圍 ( m /z) 50 ～ 650。每種目標(biāo)化合物定性、定量離子見表 1。

1． 2． 3 中性氧化鋁柱的制備

參照 GB /T 25223—2010《動植物油脂 甾醇組成和甾醇總量的測定 氣相色譜法》并稍作改進(jìn)。在 20 mL 乙醇中加入 10 g 中性氧化鋁混合，并將混合液倒入層析柱中，使氧化鋁沉降并敲打至無縫隙，使
用前打開活塞使乙醇液面到達(dá)氧化鋁頂層時關(guān)閉，備用。 

1． 2． 4 樣品中三萜類化合物的提取及含量測定

準(zhǔn)確稱取每批次油茶籽油樣品( 0． 50 ± 0． 01) g， 3 個重復(fù)，加入 100 μL 內(nèi)標(biāo)物( 1 mg /mL 膽甾烷醇) 和 2% 的氫氧化鉀 － 乙醇溶液，混勻，75 ℃ 下水浴回流 1 h 后冷卻至室溫，取 5 mL 皂化液至中性氧化鋁柱，先用 5 mL 乙醇洗滌不皂化物，后用 30 mL 正己烷洗脫并控制流速，收集洗脫液。洗脫液在 65 ℃ 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸干后復(fù)溶于 5 mL 正己烷，轉(zhuǎn)移到 15 mL玻璃離心小管中，氮吹后加入 100 μL 硅烷化試劑( 99∶ 1 BSTFA － TMCS 和等體積無水嘧啶) 衍生試劑，室溫放置 15 min，加入 1 500 μL 正己烷稀釋，過 0． 22 μm 有機(jī)濾膜，進(jìn)樣，按 1． 2． 2 條件進(jìn)行 GC － MS 分析，峰面積帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中計算各三萜類化合物的含量。

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