本文采用高效液相色譜法測定含乳飲料中的乙酰磺胺酸鉀，對《飲料中乙?；前匪徕浀臏y定》(GB/T 5009.140—2003)中的檢測方法進行改進。結(jié)果表明，改進后的方法在5.197 5～127.74 0μg/mL范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)為0.999，平均回收率為91.77%～99.46%，RSD為0.8%～1.9%；方法檢出限為3.8μg/g；檢測結(jié)果與國家標準方法檢測的結(jié)果相近。由此可見，該方法具有較高的可靠性和準確性。

乙酰磺胺酸鉀又名安賽蜜，為人工合成甜味劑，易溶于水，難溶于乙醇等有機溶劑，在空氣中不吸濕，對熱、酸穩(wěn)定，是目前世界上穩(wěn)定性最高的甜味劑之一。乙?；前匪徕浛膳c其他甜味劑混合使用，適用于烘烤食品、酸性飲料及供糖尿病人的食品和低能量食品中。

安賽蜜在1983年被FAO/WHO聯(lián)合食品添加劑專家委員會列為A級食品添加劑，并推薦日均攝入量為0～15 mg/kg。安賽蜜在人體內(nèi)不代謝、不積蓄，100%以原形物質(zhì)從尿中排出體外。在GB 2760—2014中，對于飲料類，乙?；前匪徕浀南拗禐?.3g/kg。

1材料與方法

1.1材料與試劑

市售乳飲料，4份；甲醇，色譜純；乙腈，分析純；乙酰磺胺酸鉀標準品，純度99.0%，Dr.Ehrenstorfer GmbH。乙?；前匪徕洏藴寿A備液：稱取純度為99%的乙酰磺胺酸鉀標準品10.50 mg到10.00 mL容量瓶，用水定容至刻度，搖勻，配制成濃度為1.039 5 mg/mL的溶液。亞鐵氰化鉀溶液(92 g/L)：稱取92 g亞鐵氰化鉀，加入適量水溶解，用水定容至1 000 mL。乙酸鋅溶液：稱取22.0 g乙酸鋅溶于少量水中，加入30 mL冰乙酸，用水定容至100 mL。10%硫酸溶液：量取10 mL濃硫酸，慢慢用水定容至100 mL。其余有機試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2儀器與設(shè)備

1290液相色譜儀，美國安捷倫科技有限公司；AllegraX-15R離心機，美國貝克曼公司；CPA2250電子分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司；VXR振蕩器，德國IKA公司。

1.3方法

1.3.1色譜條件

色譜柱：JADE-PAK ODS-AQ 3.5μm 100 mm×2.1 mm；流動相：0.02 moL/L乙酸銨-甲醇(90∶10)；流速：0.40 mL/min；柱溫：35℃；檢測波長：214 nm；進樣量：1μL。

1.3.2 GB/T 5009.140—2003的方法

取樣品2.50 g，加水約20 mL搖勻后，離心15 min，待水溶液流至柱表面時，用0.02 mol/L硫酸銨-甲醇-乙腈-10%硫酸洗脫。收集洗脫液25 mL，搖勻，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾，進高效液相色譜儀分析。

1.3.3改進方法

取樣品2.50 g至50 mL離心管，加水20 mL，加入乙酸鉛2 mL和亞鐵氰化鉀2 mL，用水定容至25.0 mL，振蕩離心3 min，取上清液5.00 mL至15 mL離心管中，再加入1.00 mL10%硫酸和5.00 mL乙腈，振蕩2 min，離心3 min，上清液乙腈層經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾，進高效液相色譜儀分析。

2結(jié)果與分析

2.1 GB/T 5009.140—2003檢測方法

2.1.1國家標準方法檢測結(jié)果

取市售的某4種含乳飲料，編號分別為T1、T2、T3和T4。稱取這4種樣品各2.50 g(精確到0.01 g)，每份樣品稱取2份，并按照GB/T 5009.140—2003的方法進行檢測，得到結(jié)果：T1為125 mg/kg，T2為138 mg/kg，T3為230 mg/kg，T4未檢出。

2.1.2國家標準方法的回收率

稱取4份T4樣品各2.50 g，編號為T4-ADD-1、T4-ADD-2、T4-ADD-3和T4-ADD-4加入乙酰磺胺酸鉀標準溶液0.80 mL，余下步驟按照GB/T 5009.140—2003的方法測定乙?；前匪徕浀暮?，回收率分別為90.8%、92.2%、91.9%和95.6%，平均回收率為92.6%。

2.2改進方法

2.2.1標準曲線

精密吸取乙?；前匪徕洏藴寿A備液0.10 mL、0.20 mL、0.30 mL、0.40 mL、0.60 mL和1.20 mL分別至不同的20.00 mL容量瓶，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，配制成濃度為5.197 5μg/mL、10.395μg/mL、20.790μg/mL、41.580μg/mL、62.370μg/mL和127.74μg/mL的標準系列溶液。結(jié)果表明，乙酰磺胺酸鉀在5.1975～127.74μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.2改進方法的精密度試驗

取濃度為62.370μg/mL的乙?；前匪徕洏藴嗜芤?，按照改進方法連續(xù)進樣5次。得到5次乙酰磺胺酸鉀的響應(yīng)值，其響應(yīng)值的相對標準偏差為0.6%，小于2%，表明該方法精密度良好。

2.2.3樣品的測定

取編號為T1、T2、T3、T4的4批含乳飲料，按改進方法進行檢測，結(jié)果：T1為132 mg/kg，T2為132 mg/kg，T3為220 mg/kg，T4未檢出。檢測結(jié)果表明，用國家標準方法檢測的結(jié)果與改進方法檢測的結(jié)果相近。

2.2.4改進方法的回收率試驗

稱取T3樣品2.50 g(精確到0.01 g)共9份，編號分別為A、B、C、D、E、F、G、H、I。其中A、B、C樣品加入乙酰磺胺酸鉀標準溶液0.40 mL；其中D、E、F樣品加入乙?；前匪徕洏藴嗜芤?.80 mL；其中G、H、I樣品加入?；前匪徕洏藴嗜芤?.20 mL，然后按改進方法進行檢測。結(jié)果表明，該方法的回收率在91.71%～99.46%，RSD為0.8%～1.9%，說明該方法的結(jié)果穩(wěn)定，數(shù)據(jù)可靠。

2.2.5改進方法的空白試驗

不稱取樣品溶液，余下步驟按改進方法操作。結(jié)果顯示，空白試驗無干擾，對檢測結(jié)果沒有影響。

2.2.6改進方法的重現(xiàn)性試驗

稱取6份T1樣品各2.50 g，編號分別為T1-1、T1-2、T1-3、T1-4、T1-5和T1-6，按照改進方法操作，6份樣品響應(yīng)值分別為：134.1 mg/kg、131.1 mg/kg、131.5 mg/kg、129.3 mg/kg、134.2 mg/kg和134.3 mg/kg，乙?；前匪徕浐科骄禐?32 mg/kg，RSD為1.6%。結(jié)果表明，該改進方法的重現(xiàn)性好，結(jié)果穩(wěn)定。

2.2.7改進方法的檢出限試驗

取T4樣品2.50 g，加入0.15 mL濃度為62.370μg/mL的乙?；前匪徕洏藴室?，然后按改進方法操作，得到檢出限溶液，按1.3.1中色譜條件進行測定，得到乙?；前匪徕浀男旁氡葹?，檢出限為3.8μg/g，優(yōu)于GB/T 5009.140—2003中4μg/g的檢出限值。

2.3結(jié)論

在改進方法探究中，可先用水稀釋樣品，再利用亞鐵氰化鉀溶液和乙酸鋅溶液反應(yīng)產(chǎn)出沉淀的原理除去含乳飲料中的蛋白質(zhì)，然后利用2 g無水硫酸鎂和0.5 g氯化鈉、10%硫酸和乙腈進行富集、凈化，從而促使操作簡單化。

3結(jié)論

本文采用的改進方法通過用水稀釋樣品，用蛋白質(zhì)沉淀劑除去含乳飲料中的大量的蛋白質(zhì)。利用乙酰磺胺酸鉀呈弱酸性的特點，在酸性條件下，抑制乙?；前匪徕涬婋x，并且利用乙腈和飽和鹽溶液分層的特點，從而得到乙腈層。高速離心讓水相乙腈層更好的分層，從而對樣品進行凈化，并把乙腈層過濾，上機測定。

結(jié)果表明，改進后的方法在5.197 5～127.74 0μg/mL范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)為0.999，呈良好的線性關(guān)系；精密度與重現(xiàn)性的RSD均小于2%，滿足國家標準的要求；平均回收率為91.77%～99.46%，RSD為0.8%～1.9%；方法檢出限為3.8μg/g，優(yōu)于國家標準4μg/g；市售的4批含乳飲料通過改進方法與國家標準方法檢測相比，結(jié)果相近，精密度均小于國家標準10%的要求。由此可見，該方法有較高的可靠性和準確性。

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