2結(jié)果

2.1陽性符合率

分別對(duì)確診的15例新冠肺炎臨床陽性樣本進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算每種試劑盒的陽性符合率。結(jié)果顯示，陽性符合率在90.0%～100.0%的有3種，80.0%～<90.0%的有1種，70.0%～<80.0%的有2種；其中，試劑盒D的陽性符合率最好，為100.0%，試劑盒C和E的陽性符合率均為93.3.%，試劑盒A的陽性符合率為80.0%，試劑盒B和F的陽性符合率最差，均為73.3%，詳見表2。

2.2陰性符合率

分別對(duì)20例臨床陰性樣本進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算每種試劑盒的陰性符合率。結(jié)果顯示，6種試劑盒的陰性符合率均為100.0%，詳見表3。

2.3檢出限

采用6種試劑盒測(cè)試國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稀釋成的不同梯度溶液，結(jié)果為在稀釋比1∶16水平檢出的試劑盒有1種，在1∶12水平檢出的有2種，在1∶8水平檢出的有3種，在1∶4和1∶2水平檢出的均有5種，原倍6種試劑盒均檢出。其中，試劑盒D的檢出限最低，試劑盒A、C、E的檢出限水平居中，試劑盒F的檢出限最高，6種試劑盒的檢出限呈梯度分布，詳見表4。

3討論

在新冠肺炎疫情期間，雖然核酸檢測(cè)在臨床診斷中作為“金標(biāo)準(zhǔn)”存在，但新冠病毒感染患者主要表現(xiàn)為下呼吸道感染，且治療后體內(nèi)病毒含量逐漸降低，核酸檢測(cè)受樣本采樣部位和時(shí)間的影響易產(chǎn)生假陰性結(jié)果。在核酸檢測(cè)前需對(duì)樣本進(jìn)行病毒滅活處理，也有研究表明，病毒滅活過程對(duì)于病毒含量較高的樣本檢出率無明顯影響，但可能會(huì)導(dǎo)致病毒含量較低樣本的檢出率下降，從而產(chǎn)生假陰性結(jié)果。目前已有回顧性研究表明，高度疑似新冠病毒感染患者的病毒核酸陽性檢出率僅為30%～50%。另外，核酸檢測(cè)對(duì)儀器設(shè)備、檢測(cè)場(chǎng)地和環(huán)境條件以及操作人員的要求較高，存在檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、通量低等缺點(diǎn)。而膠體金法抗體檢測(cè)試劑盒的優(yōu)勢(shì)在于采集樣本容易、單個(gè)樣本即可測(cè)試、測(cè)試時(shí)間短、成本低、樣本處理和實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，非常適合基層大批量樣本的現(xiàn)場(chǎng)篩查。因此，將膠體法抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)和核酸檢測(cè)結(jié)合使用并聯(lián)合咽拭子、糞便和血液等多種樣本進(jìn)行檢測(cè)診斷，對(duì)縮短檢測(cè)窗口期、盡早控制疫情發(fā)展非常重要。

鑒于新冠病毒傳染性較強(qiáng)，早發(fā)現(xiàn)、早報(bào)告、早隔離、早治療對(duì)于疾病防控的意義重大。而膠體金法抗體檢測(cè)試劑盒的檢出限與其在低值樣本中檢出陽性的能力有關(guān)，檢出限低的試劑盒漏診率也低。因此，除了陽性符合率和陰性符合率以外，檢出限也是評(píng)價(jià)新冠病毒檢測(cè)試劑盒的重要指標(biāo)。當(dāng)然，這里需要明確的是，試劑盒的檢出限指的是由給定測(cè)量程序得到的測(cè)量值，對(duì)于此值，在給定聲稱物質(zhì)中存在某成分的誤判概率為α時(shí)，聲稱不存在該成分的誤判概率為β，與臨床的“真陽”不盡相同。

目前，新冠病毒抗體檢測(cè)試劑盒分為刺突糖蛋白S或核衣殼蛋白N作為包被抗原。S蛋白是病毒感染人體細(xì)胞的武器，SARS冠狀病毒和新冠病毒都是通過S蛋白結(jié)合呼吸道上皮細(xì)胞的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2，從而侵入肺組織，導(dǎo)致肺炎。新冠病毒N蛋白與SARS冠狀病毒N蛋白具有高度同源性,N蛋白是冠狀病毒中產(chǎn)生最早且含量較多的蛋白質(zhì)，具有很強(qiáng)的免疫原性和特異性，是抗體診斷材料的首選。但是N蛋白抗體基本上在發(fā)病10 d才開始大量產(chǎn)生，有研究認(rèn)為N蛋白抗體作為早期診斷指標(biāo)可能存在一定的不足。因此，市面上絕大多數(shù)抗體檢測(cè)試劑盒選擇重組S蛋白包被檢測(cè)線。本研究選擇的6種國(guó)產(chǎn)試劑盒均為抗新冠病毒S蛋白Ig G抗體檢測(cè)試劑盒。

通過研究結(jié)果可知：（1）試劑盒A和B的檢出限較低，但陽性符合率分別為80.0%和73.3%，不及檢出限居中的試劑盒C和E（陽性符合率均為93.3%）。考慮以下幾方面原因：(1)選擇的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是以新冠病毒重組刺突糖蛋白（S蛋白）為免疫原篩選出的Ig G單克隆抗體進(jìn)行人源化改造的模擬人血清，當(dāng)試劑盒選擇的特異性識(shí)別位點(diǎn)以及肽段長(zhǎng)度接近于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時(shí)，則檢出限低；(2)有研究表明，重組蛋白誘導(dǎo)的免疫效率較低，可能與免疫途徑相關(guān)。同時(shí)，選擇的蛋白表達(dá)系統(tǒng)不同，也會(huì)影響試劑盒的陰性符合率、陽性符合率和檢出限。(3)定性試劑盒的說明書中對(duì)檢驗(yàn)方法的操作描述并不規(guī)范，比如，雖然樣本稀釋液都是2滴，但實(shí)際這6家生產(chǎn)廠家對(duì)2滴樣本稀釋液的具體體積解釋最低的約為60μL，最高的約為100μL，跨度較大，對(duì)檢出限的檢測(cè)結(jié)果也有影響。

(2）試劑盒D的檢出限最低，且陽性符合率為100.0%，陰性符合率也為100.0%。試劑盒D為多點(diǎn)抓取，多種重組蛋白嵌合抗原覆蓋的抗原表位比單一重組蛋白要多得多，而檢出限最高且陽性符合率為73.3%的試劑盒F則為兩點(diǎn)識(shí)別。因此，試劑盒D檢測(cè)臨床樣本的陽性符合率和陰性符合率都更好。

(3）試劑盒F的檢出限最高，且陽性符合率為73.3%，陰性符合率為100.0%，與其他試劑盒相比差異較大。分析除了上面提及的特異性識(shí)別位點(diǎn)不同、蛋白表達(dá)系統(tǒng)不同、樣品稀釋液的量值解釋不同以外，上樣量也是影響檢出限檢測(cè)結(jié)果的一個(gè)原因。有研究表明，上樣量、樣品稀釋液、反應(yīng)時(shí)間和檢測(cè)環(huán)境均會(huì)對(duì)膠體金法檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響。試劑盒F說明書中關(guān)于上樣量的描述是“吸管1滴”，不同操作者及手法、不同環(huán)境條件都會(huì)對(duì)上樣量產(chǎn)生影響，從而影響檢測(cè)結(jié)果。

綜上所述，對(duì)膠體金試條而言，樣本經(jīng)過試條的時(shí)間長(zhǎng)短、操作環(huán)境以及標(biāo)記抗體的純度都會(huì)影響金顆粒的聚集以及非特異性結(jié)合，進(jìn)而影響結(jié)果判定。為了提高國(guó)產(chǎn)新冠病毒抗體檢測(cè)試劑盒的性能，建議生產(chǎn)廠家從以下幾方面優(yōu)化產(chǎn)品：（1）加大研發(fā)投入，優(yōu)化生產(chǎn)工藝，生產(chǎn)廠家可以同步采用原核和真核表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行新冠肺炎多種病毒蛋白表達(dá)，并針對(duì)多種蛋白質(zhì)特異多肽片段進(jìn)行融合表達(dá)，優(yōu)化組合，篩選出具有較強(qiáng)免疫原性和特異性的蛋白質(zhì)或設(shè)計(jì)蛋白聯(lián)合檢測(cè)，以提高試劑盒的陽性符合率、陰性符合率和檢出限；（2）做好供應(yīng)商評(píng)價(jià)，嚴(yán)格把握出廠檢驗(yàn)，生產(chǎn)廠家內(nèi)部質(zhì)控盤的設(shè)定應(yīng)盡量貼近臨床實(shí)際使用情況；（3）通過規(guī)范說明書中對(duì)操作方法和環(huán)境要求的描述來提高試劑盒的穩(wěn)定性，在操作過程中應(yīng)嚴(yán)格按照說明書操作。

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