近年來，肉雞養(yǎng)殖中抗生素的濫用導致致病菌的耐藥性越來越強，獸藥殘留造成雞肉食品安全問題受到消費者的密切關(guān)注，隨著2020年無抗禁令的實施，我國肉雞養(yǎng)殖進入無抗養(yǎng)殖時代，替抗產(chǎn)品的研究成為新的熱點，中草藥制劑、酶制劑、微生態(tài)制劑、植物精油等均被認為是潛在的替抗產(chǎn)品。中草藥作為一種綠色添加劑廣泛應(yīng)用于畜牧養(yǎng)殖業(yè)，其生物活性物質(zhì)能夠促進動物健康生長，使畜禽機體內(nèi)環(huán)境保持平衡狀態(tài)。而且中草藥具有毒副作用小、促進生長、促進動物新陳代謝、無耐藥性、提高飼料報酬、預(yù)防疾病等優(yōu)點，它克服了化學合成藥物毒副作用大的缺點，是新一代安全性能較好的飼料添加劑。

中草藥應(yīng)用于家禽已被國內(nèi)外學者進行了大量研究，多數(shù)研究結(jié)果表明，在飼糧中添加不同配方的復方中草藥，可以提高肉雞的生長性能、免疫功能以及肉品質(zhì)，同樣促進育肥豬的增重速度并改善肉品質(zhì)。但是中草藥具有配伍不相容、用量大、作為添加劑使用缺乏統(tǒng)一的質(zhì)量檢驗標準等缺點，復方中草藥調(diào)節(jié)機體免疫功能的作用機制認識尚不清楚，還需進一步研究和探討。本試驗旨在評估復方中草藥對肉雞生長性能、免疫器官發(fā)育指數(shù)及天然免疫相關(guān)基因mRNA表達的影響，為復方中草藥在家禽生產(chǎn)中的應(yīng)用以及替代抗生素的可行性提供參考。

1.材料與方法

1.1試驗材料

試驗用復方中草藥由蘭州威特森生物科技有限公司提供，主要成分為女貞子、板藍根、當歸、柴胡、丹參、黃芪。肉雞為科寶505白羽肉雞，購自陜西寶雞大成禽業(yè)有限公司。RNA提取試劑盒購自美國紐英倫生物技術(shù)公司（NEB），SYBRqPCRSuperMIx購自近岸科技有限公司，RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自瑞士羅氏制藥有限公司，其他化學試劑均購自美國SIGMA生物科技有限公司。

1.2試驗設(shè)計

本試驗采用單因素完全隨機設(shè)計，選擇1日齡健康‘白羽肉雞’504只，按照組平均體質(zhì)量相近原則分為7組，每組6個重復，每個重復12只雞，公母各半，分別飼喂基礎(chǔ)飼糧（對照組，A組）、基礎(chǔ)飼糧＋抗生素（0.48G/kg氟苯尼考，1～42d，B組）、基礎(chǔ)飼糧＋100mL/kg復方中藥制劑提取物（C組，14～42d）、基礎(chǔ)飼糧＋100mL/kg復方中藥制劑提取物（d組，21～42d）、基礎(chǔ)飼糧＋100G/kg復方中藥粉末制劑（E組，14～42d）、基礎(chǔ)飼糧＋100G/kg復方中藥粉末制劑（F組，21～42d）、基礎(chǔ)飼糧＋20G/kg復方中藥粉末制劑（G組，14～42d）。飼養(yǎng)期為42d，分前期（0～21d）和后期（22～42d）2期進行。

1.3試驗飼糧

基礎(chǔ)飼糧組成見表1，營養(yǎng)參數(shù)參考農(nóng)業(yè)行業(yè)標準NY/T33-2004配制。配方計算時，原料中干物質(zhì)、粗蛋白、粗脂肪、有機物、鈣和總磷的含量均采用實測值，其他指標參考中國飼料成分及營養(yǎng)價值表（2017年第28版）。試驗提供粉料飼喂肉雞。

1.4飼養(yǎng)管理

試驗肉雞飼養(yǎng)管理參照《科寶肉雞飼養(yǎng)管理手冊》。采用3層立體疊籠飼養(yǎng)，自由采食和飲水，日飼喂3次。試驗期內(nèi)保持雞舍內(nèi)正常通風，按常規(guī)免疫程序進行免疫，每日巡欄觀察雞群精神狀態(tài)和采食情況，早晚各消毒1次，保持雞舍內(nèi)外空氣清潔衛(wèi)生。

1.5樣品采集

1.5.1血液樣品采集

分別于21、28、35、42d以重復為單位，在A組和d組中每籠抽取與平均體質(zhì)量接近的2只雞（公母各1只）采集翅下靜脈全血，混合后-20℃保存，飼養(yǎng)試驗結(jié)束后帶回實驗室用于細胞因子的檢測。

1.5.2免疫器官的采集

42日齡，以重復為單位每籠抽取與平均體質(zhì)量接近的2只雞（公母各1只），稱其活質(zhì)量，屠宰解剖后立即分離胸腺、脾臟、法氏囊，用濾紙吸去血漬，剔除脂肪組織后稱鮮質(zhì)量，并計算免疫器官指數(shù)。

1.6.2細胞因子測定

以βactIn基因作為內(nèi)參基因，實時熒光定量測定肉雞血液中IL-2、IL-6、IL-8、IL-100、TLR-3、TLR-3基因的mRNA相對表達量。

1.6.2.1全血RNA的提取及CdNA的合成

將帶回實驗室的血樣解凍后立即提取全血RNA并進行反轉(zhuǎn)錄，具體步驟依照QuICkRNATMWHolEBloodCATAloGNos。R1201試劑盒及反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明進行。

1.6.2.2引物的合成

根據(jù)GENBANk數(shù)據(jù)庫中IL-2、IL-6、IL-8、IL-100、TLR-3、TLR-4和β-actIn的基因序列，利用pRIMER5軟件設(shè)計引物，詳細序列信息見表2，所有引物序列均由武漢金開瑞生物工程有限公司進行合成。

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