近年來，隨著食品工業(yè)的快速發(fā)展，食品添加劑在改善食品的色香味及食品品質(zhì)等方面的作用越發(fā)凸顯。目前常用的食品添加劑有防腐劑、甜味劑、抗氧化劑、著色劑等。為規(guī)范食品添加劑的使用，保障消費(fèi)者的食品質(zhì)量安全，我國GB2760-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》對各類食品添加劑的使用范圍及相應(yīng)限量都做了明確規(guī)定。其中，糖精鈉作為甜味劑，在糕點(diǎn)中不得使用，但由于其甜度高、價(jià)格低廉，常常被不法商家超范圍用于糕點(diǎn)加工過程；脫氫乙酸作為防腐劑，在糕點(diǎn)中的使用限量為0.59/kg，但超限量使用脫氫乙酸的現(xiàn)象屢有報(bào)道。因此，監(jiān)管部門必須對糕點(diǎn)中糖精鈉、脫氫乙酸的使用量進(jìn)行嚴(yán)格管理。

我國國家標(biāo)準(zhǔn)，GB5009.28及GB5009.121分別規(guī)定了食品中糖精鈉和脫氫乙酸的檢測方法，但兩者不能同時(shí)檢測。文獻(xiàn)關(guān)于糖精鈉的測定方法主要有液相色譜法和液質(zhì)聯(lián)用法；脫氫乙酸的測定方法主要有：液相色譜法、氣相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法及氣質(zhì)法。其中液相法因操作簡單、不需要衍生化、使用成本低等優(yōu)點(diǎn)，仍是目前測定食品添加劑的首選方法。徐淵金等報(bào)道了糖精鈉和脫氫乙酸同時(shí)測定的方法，方法使用紫外檢測器定性定量，由于紫外檢測器僅靠保留時(shí)間定性，無法避免與目標(biāo)組分保留時(shí)間相近的雜質(zhì)組分的干擾，對基質(zhì)復(fù)雜的糕點(diǎn)樣品而言，往往會使測量結(jié)果偏高，甚至導(dǎo)致假陽性結(jié)果出現(xiàn)；王健等報(bào)道了HPLC快速測定月餅中5種添加劑的方法，方法采用等度洗脫，脫氫乙酸的色譜峰明顯拖尾。針對上述方法存在的問題，本文從色譜分離、定性、定量等方面對高效液相色譜法同時(shí)檢測糕點(diǎn)中糖精鈉和脫氫乙酸做了優(yōu)化和改進(jìn)。方法采用二極管陣列檢測器，在獲取待測物質(zhì)吸光度的同時(shí)，還能進(jìn)行光譜圖的比較，增加定性的準(zhǔn)確性。通過優(yōu)化流動相的種類、洗脫梯度及色譜柱，實(shí)現(xiàn)糖精鈉和脫氫乙酸的同時(shí)測定，且使脫氫乙酸的拖尾現(xiàn)象得到抑制，提高了方法定量的準(zhǔn)確性。方法的建立，解決了糕點(diǎn)中糖精鈉和脫氫乙酸難以同時(shí)測定的難題，縮短了分析時(shí)間，提高了工作效率，為食品監(jiān)管工作者提供有利的技術(shù)支持。

一、材料與方法

1、材料與試劑

甲醇(色譜純，美國Fisher公司)；乙酸銨(分析純，國藥集團(tuán)有限公司)；氫氧化鈉(分析純，國藥集團(tuán)有限公司)；硫酸鋅(分析純，國藥集團(tuán)有限公司)；脫氫乙酸(CAS：520-45-6，標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99.5％；德國Dr公司)，二水合糖精鈉(CAS：82385-42-0，標(biāo)準(zhǔn)品：1.0mg/mL，純度≥99.5％；中國計(jì)量科學(xué)研究院)。0.45μm微孔濾膜：有機(jī)系。

2、儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀：配二極管陣列檢測器(e2695，美國waters公司)；分析天平(感量0.1mg，MS204，梅特勒公司)；分析天平(感量lmg，MS303，梅特勒公司)；超聲波清洗器(寧波新芝有限責(zé)任公司)；離心機(jī)(3-18k，德國sigma公司)；旋渦混合器(美國IKA公司)。

3、方法與步驟

（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確稱取脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品100mg(精確至0.1mg)于100mL容量瓶中，用10mL0.1mol/L氫氧化鈉溶液溶解，并用水定容至刻度。分別吸取一定體積的脫氫乙酸貯備液及糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液于100mL容量瓶中，用水定容。配制成濃度依次為0.4μg/mL、1.01μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

（2）色譜條件

色譜柱：AtlanfisT3(250mm*4.6mm，5μm，美國waters公司)；流動相A為甲醇，B為10mmol/L醋酸銨(醋酸調(diào)PH=5.5)，洗脫梯度為：0～5min，16％A，5.1min～15min，28％A，15.1min～20min，80％A，20.1min，16％A，保持10min；柱溫：35℃；進(jìn)樣體積：10μL；檢測波長：230nm。

（3）樣品處理

稱取樣品2g(精確至0.001g)，置于25mL離心管中，加入約10mL水、0.5mL0.5mol/L氫氧化鈉溶液，振搖，超聲10min，取出，再分別加入lmL0.42mol/L硫酸鋅溶液和1mL0.5mol/L氫氧化鈉溶液，用力振搖后，用水定容至刻度，搖勻。靜置分層，取上清液過0.45μm有機(jī)濾膜，濾液供高效液相色譜測定。

二、結(jié)果與討論

1、樣品前處理方法優(yōu)化

糕點(diǎn)樣品含有脂肪、蛋白、淀粉、糖類等多種成分，基質(zhì)復(fù)雜，對前處理要求較高。本方法研究了不同沉淀劑對目標(biāo)分析物回收率的影響。比較了氫氧化鈉和硫酸鋅沉淀體系及亞鐵氰化鉀和乙酸鋅沉淀體系的沉淀效果。不同加標(biāo)水平的樣品經(jīng)兩種沉淀方式處理后所得回收率的比較見表1。由表1發(fā)現(xiàn)，樣品經(jīng)氫氧化鈉和硫酸鋅沉淀后，兩種分析物的回收率明顯高于用亞鐵氰化鉀和乙酸鋅沉淀的樣品。實(shí)驗(yàn)還考察了沉淀劑的用量(0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL)對目標(biāo)物回收率的影響。沉淀劑用量小，沉淀效果欠佳；用量大，易產(chǎn)生大量絮狀沉淀，對目標(biāo)物產(chǎn)生不同程度的吸附，使回收率降低(圖1，沉淀劑的用量以硫酸鋅的用量表示)。綜合考慮，選擇lmL0.5mol/L氫氧化鈉和lmL硫酸鋅溶液為樣品沉淀劑。

方法還比較了樣品提取時(shí)，氫氧化鈉的加入對脫氫乙酸回收率的影響。發(fā)現(xiàn)樣品加入0.5mL氫氧化鈉，能明顯提高脫氫乙酸的提取回收率，這是由于氫氧化鈉的加入，使樣品中的脫氫乙酸轉(zhuǎn)化為水溶性較強(qiáng)的脫氫乙酸鈉，從而增大了目標(biāo)物的在水相提取體系中的溶解度，方法的回收率得到提高。

2、色譜條件的優(yōu)化

（1）色譜柱的選擇

實(shí)現(xiàn)糖精鈉和脫氫乙酸的同時(shí)測定，選擇合適的色譜柱尤為關(guān)鍵。實(shí)驗(yàn)考察了SemetryC18，XbrigdeC18及AtalatisT3C18色譜柱的分離效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，三種色譜柱對糖精鈉和脫氫乙酸都有較好的保留，但是，SemetryC18及XbrigdeC18色譜柱，糖精鈉和脫氫乙酸的保留時(shí)間非常接近，僅通過改變流動相中甲醇的比例難以實(shí)現(xiàn)兩者的基線分離，且脫氫乙酸拖尾嚴(yán)重，嚴(yán)重影響定量的準(zhǔn)確性。采用AtalatisT3C18色譜柱，能很好解決了脫氫乙酸的拖尾問題，與普通C18色譜柱相比，峰形得到了極大地改善。

（2）流動相優(yōu)化

脫氫乙酸的電離常數(shù)為4.1，通過調(diào)節(jié)pH，使脫氫乙酸以單一分子形式或完全離子形式存在，峰形對稱，而糖精鈉的保留不受流動相pH的影響。通過優(yōu)化，選擇醋酸銨流動相的pH為5.5。通過優(yōu)化流動相梯度，使糖精鈉和脫氫乙酸的保留時(shí)間適中，與雜質(zhì)很好的分離。在優(yōu)化的流動相條件下，糖精鈉、脫氫乙酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖(5μg/mL)見圖2。

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