結(jié)晶紫，以N，N-二甲基苯胺為原料，經(jīng)過加工得到成品，是一種三苯基甲烷染料。結(jié)晶紫用途廣泛，多用于消毒、殺菌、生物染色劑、獸藥、飼料等。結(jié)晶紫以其殺菌效果好，保鮮效果佳的特點(diǎn)，多年來(lái)廣泛用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)和水產(chǎn)品長(zhǎng)途運(yùn)輸。然而，研究發(fā)現(xiàn)結(jié)晶紫易被生物組織吸收，在生物體內(nèi)代謝后生成具有致癌、致畸、高毒、高殘留特性的隱性結(jié)晶紫。目前很多國(guó)家地區(qū)都將結(jié)晶紫列為水產(chǎn)養(yǎng)殖的禁用藥物，我國(guó)目前也將結(jié)晶紫列為可食用動(dòng)物禁用獸藥。

近年來(lái)，可食用動(dòng)物中違規(guī)使用結(jié)晶紫等藥品的情況備受關(guān)注。歐盟要求水產(chǎn)品中結(jié)晶紫不得檢出。2005年，我國(guó)發(fā)布實(shí)施的GB/T19857-2005《水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留量的測(cè)定》規(guī)定結(jié)晶紫的檢測(cè)限為2.0μg/kg。

然而，檢測(cè)過程中時(shí)常遇到試劑空白檢出結(jié)晶紫，以及分析結(jié)果穩(wěn)定性差的現(xiàn)象。國(guó)內(nèi)有學(xué)者對(duì)結(jié)晶紫檢測(cè)做了相關(guān)研究。吳淑秀等應(yīng)用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定了實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)過程中常用的筆、紙、標(biāo)簽、樣品袋等用品中結(jié)晶紫的含量。結(jié)果表明，大部分供試物品均含有一定量的結(jié)晶紫，其中A4打印紙、標(biāo)簽紙和圓珠筆中含量很高。高華鵬等采用超高效液相串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定了結(jié)晶紫和隱性結(jié)晶紫的含量，結(jié)果顯示出實(shí)驗(yàn)室用品均能檢出結(jié)晶紫。許榮富等用反相柱成功地分離出了結(jié)晶紫、甲基紫、堿性品藍(lán)、堿性艷藍(lán)B、銅酞菁和羅丹明B等幾種有色染料成分，檢測(cè)出圓珠筆的結(jié)晶紫含量。

本文針對(duì)水產(chǎn)品檢測(cè)過程中結(jié)晶紫檢測(cè)干擾因素進(jìn)行分析，在不同的時(shí)間條件下，對(duì)試驗(yàn)可能接觸的辦公用品如紙、筆、標(biāo)簽紙，以及包裝材料如留樣用塑料袋中的結(jié)晶紫含量進(jìn)行檢測(cè)，從而得出隨時(shí)間變化的干擾因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。

1材料與方法

1.1試劑與儀器

A4打印紙、送樣樣品標(biāo)簽紙、激光打印標(biāo)簽紙、黑色簽字筆、黑色馬克筆、藍(lán)色圓珠筆：得力集團(tuán)有限公司；實(shí)驗(yàn)室濾紙：塘玻（天津）實(shí)驗(yàn)儀器銷售有限公司；留樣用塑料袋：河源市華豐塑膠有限公司。乙腈（色譜純）：德國(guó)默克公司；乙酸銨（優(yōu)級(jí)純）：天津科密歐化學(xué)試劑公司；結(jié)晶紫、隱性結(jié)晶紫：德國(guó)Dr.Ehrensorfer公司。1290/6460超高效液質(zhì)聯(lián)用儀、EclipsePlus色譜柱C18（5μm×100mm×2.1mm）：德國(guó)Agilent公司；AL204-IC電子天平：上海梅特勒-托利多儀器；WAT200609固相萃取裝置：沃特世Waters公司；HS501振蕩器：IKA公司；1mL/cc一次性使用無(wú)菌注射器：浙江華福醫(yī)用器材有限公司；尼龍膜過濾器（0.22μm，13mm）：博納艾杰爾科技有限公司；1mL進(jìn)樣瓶：浙江愛吉仁科技有限公司；2mL塑料滴管：上海晶安生物信息有限公司。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

0.1μg/mL的結(jié)晶紫工作液的配制：精確移取0.01mL0.1mg/mL的結(jié)晶紫中間液，置于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度線于4℃以下避光儲(chǔ)存搖勻備用。

1.2.2樣品前處理

將待測(cè)的A4紙、實(shí)驗(yàn)室濾紙、送樣樣品標(biāo)簽紙、激光打印標(biāo)簽紙和留樣用塑料袋分別裁剪成2cm×2cm同樣大小的紙片，如圖1所示。把待測(cè)所用黑色簽字筆、黑色馬克筆、藍(lán)色圓珠筆分別在2cm×2cm的空白實(shí)驗(yàn)室濾紙上用力均勻地分別書寫一條、兩條、四條長(zhǎng)度為兩厘米的印記并晾干，如圖2所示。加入2mL乙腈浸提5min，渦旋振蕩5min。浸提液經(jīng)0.22μm濾膜過濾。

1.2.3不同提取時(shí)間對(duì)污染物含量影響

將裁剪好的相同濾紙中畫相同兩條黑色簽字筆印記的紙、畫有相同黑色馬克筆印記的濾紙、畫有相同藍(lán)色圓珠筆印記的濾紙、相同送樣樣品標(biāo)簽紙、相同激光打印標(biāo)簽紙、相同留樣用塑料袋分別放入50mL離心管中，加入2mL乙腈分別浸提5、10、30、60、120、240、360min和720min，浸提液經(jīng)0.22μm濾膜過濾后用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)污染物（顯性結(jié)晶紫和隱性結(jié)晶紫）含量。重復(fù)5次作為平行試驗(yàn)，從而減小誤差。

1.2.4儀器條件

1.2.4.1液相色譜條件

色譜柱：EclipsePlusC18，1.8μm×100mm×2.1mm（內(nèi)徑）；流動(dòng)相：A為500mL乙腈+500μL甲酸+0.385g乙酸銨，B為乙腈；流速：300μL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。流動(dòng)相梯度洗脫條件見表1。

1.2.4.2質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源；掃描方式：正離子掃描；檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（multiplereactionmonitoring，MRM）；電噴霧電壓：4000V；殼氣溫度：350℃；離子源溫度：300℃。

顯性結(jié)晶紫和隱性結(jié)晶紫檢測(cè)的質(zhì)譜條件見表2。

1.2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確分別吸取結(jié)晶紫的標(biāo)準(zhǔn)工作液0、1、5、10、20、50、100μL至進(jìn)樣瓶?jī)?nèi)，依次分別加入乙腈1000、999、995、990、980、950、900μL至每個(gè)進(jìn)樣瓶?jī)?nèi)，配制成濃度為0、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μg/L的結(jié)晶紫標(biāo)準(zhǔn)液。將不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液置于超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，在最佳色譜條件下進(jìn)行色譜分析，以保留時(shí)間定性，測(cè)定峰面積定量。以結(jié)晶紫及其代謝物濃度為橫坐標(biāo)，以結(jié)晶紫及其代謝物的液相峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程及其相關(guān)系數(shù)。

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