（12）牛舌草多糖對DNA氧化損傷的保護作用

參考文獻中的方法，取0.4mLlmmol/L的EDTANa溶液、0.4mL5mg/mL的DNA溶液、0.35mL5mmol/L的H₂O₂溶液、0.2mL3.2mmol/L的FeCl₃溶液和1mL不同質量濃度的精制多糖一磷酸緩沖溶液(濃度為0.2mol/L，pH=7.4)，加入0.35mL1.2mmol/L的VC溶液，在55℃水浴中反應，時間為20min，隨后向試管中快速加入0.35mL0.3mol/L硫代巴比妥酸(TBA)溶液和0.75mL0.6mol/L三氯乙酸溶液，在105℃烘箱中顯色15min，放冷后離心，取上清液測定532nm處吸光度，以磷酸緩沖溶液作為空白對照，根據(jù)下面的公式計算多糖對-OH誘導的DNA氧化損傷的保護作用：

其中：A₀為氧化損傷組(磷酸緩沖溶液+反應體系)吸光度；A₁為多糖保護組(多糖溶液+反應系)吸光度。

二、結果與分析

1、單因素試驗結果與分析

（1）料液比對牛舌草多糖提取率的影響

精密稱取5份牛舌草粉末各0.5g，置50mL具塞錐形瓶中，分別加入5mL、10mL、15mL、20mL、25mL蒸餾水，超聲30min(室溫，功率200W)，離心，得樣品提取液，精密吸取牛舌草提取液0.5mL測定多糖含量，結果見圖1，從實驗結果可以看出20mL溶劑的多糖含量最高，故選擇0.5g藥材加20mL蒸餾水(料液比為1∶40)作為提取溶劑的量。

（2）提取時間對牛舌草多糖提取率的影響

精密稱取5份牛舌草粉末各0.5g，置50mL具塞錐形瓶中，加20mL蒸餾水超聲提取10min、20min、30min、40min、50min(室溫，功率200W)，離心，得樣品提取液，精密吸取牛舌草提取液0.5mL測定多糖含量，結果見圖2，從實驗結果可以看出，超聲30min和40min時多糖提取效率較高，但考慮到時間成本，因此選用超聲30min作為提取時間。

(3)超聲功率對牛舌草多糖提取率的影響

精密稱取5份牛舌草粉末各0.5g，置50mL具塞錐形瓶中，加20mL蒸餾水分別在50W、100W、150W、200W和250W超聲提取30min，測定多糖含量，結果見圖3，從實驗結果可以看出，超聲功率為200W時的多糖含量最高，因此選用200W作為超聲提取功率。

（4）提取次數(shù)對牛舌草多糖提取率的影響

精密稱取5份牛舌草粉末各0.5g，置50mL具塞錐形瓶中，加20mL蒸餾在200W分別超聲提取1次、2次、3次、4次和5次，每次30min，測定多糖含量，結果見圖4，從實驗結果可以看出，隨著提取次數(shù)增加，多糖含量也升高，但提取3次后多糖含量升高不明顯，因此選用超聲3次作為提取次數(shù)。

2、響應面試驗結果

（1）模型的建立和數(shù)據(jù)分析

根據(jù)單因素實驗結果，以料液比(A)、提取時間(B)、超聲功率(C)、提取次數(shù)(D)為實驗因素，利用Design-Expert8.0.6軟件設計四因素三水平實驗分析，共計29個實驗，響應面實驗方案和結果見表3。

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