糕點是深受人們喜歡的一種食品，它以面粉、米粉、糖、蛋、乳制品、油脂等為主要原料，配以多種輔料、餡料、調(diào)味品經(jīng)過一定工藝制作而成，為了提高糕點的外觀、口感及延長食品的防腐保質(zhì)期，商家往往會添加一些食品添加劑，以此增加糕點的商業(yè)價值，有研究發(fā)現(xiàn)有些食品添加劑在混合使用時可能會產(chǎn)生聯(lián)合毒性作用，比如糖精鈉、檸檬黃分別與苯甲酸鈉聯(lián)合作用于L-929細(xì)胞中，可表現(xiàn)出毒性相加作用，因此，在GB2760-2014《食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中明確規(guī)定糕點等食品使用添加劑的限量。

目前，國內(nèi)外食品添加劑多組分同時檢測的方法主要有高效液相色譜法、液相色譜一質(zhì)譜法、離子色譜法、氣相色譜法等，由于液相色譜一質(zhì)譜法儀器昂貴，樣品基質(zhì)對分析成分以及儀器影響都較大，離子色譜法以及氣相色譜法對樣品前處理要求比較高，且檸檬黃、誘惑紅等人工合成色素采用離子色譜法難處理，防腐劑和甜味劑等添加劑的前處理方法不同，采用氣相色譜法檢測，前處理復(fù)雜，同時也會使樣品的提取效率低，回收偏低，已不能滿足分析需要，雖然高效液相色譜法的通用性會造成部分人工合成色素以及防腐劑出現(xiàn)假陽性，但是可以通過PAD光譜對照品與假陽性樣品進(jìn)行比對確認(rèn)，因此，鑒于上述情況，通過試驗建立一種能夠同時檢測糕點中多種食品添加劑的檢測方法顯得十分必要。

本研究主要是針對糕點中的新紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)、赤蘚紅、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸、納他霉素、富馬酸二甲酯等13種食品添加劑同時檢測，采用液相色譜法進(jìn)行檢測，優(yōu)化前處理方法以及色譜條件，對常見的人工合成色素、防腐劑以及甜味劑在糕點的檢測應(yīng)用中實現(xiàn)同時檢測，提高檢測效率，降低檢測成本，完善食品檢驗方法，有助于在食品檢驗中進(jìn)行推廣。

一、材料與方法

1、材料與試劑

樣品來源：分別購于南寧市糕點店（3家）及超市（2家）共計8個批次；

試劑：甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）均為默克股份兩合公司；乙酸銨（優(yōu)級純）：廠家為上海麥克林生化有限公司；亞鐵氰化鉀（分析純）、乙酸鋅（分析純）：廠家均為國藥集團(tuán)有限公司；

固相萃取小柱QasisWAX：廠家為Waters公司；微孔濾膜：0.45ktmGHP，廠家為Waters公司。

對照品的來源：新紅批號G119769，含量88.9％、胭脂紅批號146544，含量89.8％、亮藍(lán)批號125123，含量91.6％、赤蘚紅批號171572，含量86％、靛藍(lán)批號B0003270，含量90％、El落黃批號136871，含量90.5％、山梨酸批號50112，含量99.0％均由Dr．EhrenstroferGrnbH提供；脫氫乙酸批號80430100，含量99.0％、富馬酸二甲酯批號B0003190，含量99.9％、糖精鈉批號201501，含量100％ANPEL提供；苯甲酸批號21228，含量99.9％、納他霉素批號B0002455，99％由Bepure提供。

儀器：Waterse2695高效液相色譜儀帶PDA2998檢測器美國Waters公司lUNIVERSAL320R低溫離心機(jī)；Multivap氮吹儀；MilIi-QA10純水機(jī)Millipore公司。

2、方法

（1）對照品儲備溶液的制備

精密稱取新紅、胭脂紅、亮藍(lán)、赤蘚紅、靛藍(lán)、日落黃、誘惑紅38.25mg、12.45mg、12.77mg、25.53mg、11.17mg、34.80mg、10.76mg分別置50mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，得到7種人工合成色素濃度分別為：0.6801mg/mL、0.2236mg/mL、0.2339mg/mL、0.4391mg/mL、0.2011mg/mL、0.6299mg/mL、0.1857mg/mL；又分別精密稱取脫氫乙酸、苯甲酸、山梨酸、納他霉素、對照品27.88mg、18.19mg、11.45mg、10.00mg、11.78mg分別置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得到4種防腐劑濃度分別為：0.5520mg/mL、0.3636mg/mL、0.2267mg/mL、0.1980mg/mL；精密稱取糖精鈉對照品11.78mg置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得到1種甜味劑濃度為：0.2356mg/mL；精密稱取富馬酸二甲酯對照品10.29mg置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得到濃度為1.0280mg/mL。

（2）標(biāo)準(zhǔn)混合使用液的配制

精密量取精密稱取新紅、胭脂紅、亮藍(lán)、赤蘚紅、靛藍(lán)、日落黃、誘惑紅38.25mg、12.45mg、12.77mg、25.53mg、11.17mg、34.80mg、10.76mg分別置50mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，得到7種人工合成色素濃度分別為：0.6801mg/mL、0.2236mg/mL、0.2339mg/mL、0.4391mg/mL、0.2011mg/mL、0.6299mg/mL、0.1857mg/mL；又分別精密稱取脫氫乙酸、苯甲酸、山梨酸、納他霉素、對照品27.88mg、18.19mg、11.45mg、10.00mg、11.78mg分別置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得到4種防腐劑濃度分別為：0.5520mg/mL、0.3636mg/mL、0.2267mg/mL、0.1980mg/mL。

精密稱取糖精鈉對照品11.78mg置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得到1種甜味劑濃度為：0.2356mg/mL；精密稱取富馬酸二甲酯對照品10.29mg置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得到濃度為1.0280mg/mL對照品儲備溶液中的日落黃、新紅0.4mL，糖精鈉、亮藍(lán)、誘惑紅、靛藍(lán)、胭脂紅、山梨酸、納他霉素各取1.0mL，赤蘚紅0.7mL，脫氫乙酸0.5mL，苯甲酸取0.03mL，富馬酸二甲酯取0.25mL置同一25mL容量瓶中，搖勻，加水稀釋至刻度。

（3）標(biāo)準(zhǔn)線性的配制

取精密量取精密稱取新紅、胭脂紅、亮藍(lán)、赤蘚紅、靛藍(lán)、日落黃、誘惑紅38.25mg、12.45mg、12.77mg、25.53mg、11.17mg、34.80mg、10.76mg分別置50mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，得到7種人工合成色素濃度分別為：0.6801mg/mL、0.2236mg/mL、0.2339mg/mL、0.4391mg/mL、0.2011mg/mL、0.6299mg/mL、0.1857mg/mL；又分別精密稱取脫氫乙酸、苯甲酸、山梨酸、納他霉素、對照品27.88mg、18.19mg、11.45mg、10.00mg、11.78mg分別置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得到4種防腐劑濃度分別為：0.5520mg/mL、0.3636mg/mL、0.2267mg/mL、0.1980mg/mL。

精密稱取糖精鈉對照品11.78mg置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得到1種甜味劑濃度為：0.2356mg/mL；精密稱取富馬酸二甲酯對照品10.29mg置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得到濃度為1.0280mg/mL對照品儲備溶液中的日落黃、新紅0.4mL，糖精鈉、亮藍(lán)、誘惑紅、靛藍(lán)、胭脂紅、山梨酸、納他霉素各取1.0mL，赤蘚紅0.7mL，脫氫乙酸0.5mL，苯甲酸取0.03mL，富馬酸二甲酯取0.25mL置同一25mL容量瓶中，搖勻，加水稀釋至刻度的標(biāo)準(zhǔn)混合使用液0.1mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、2.5mL分別置5mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻即得標(biāo)準(zhǔn)系列1～5的標(biāo)準(zhǔn)混合使用液。

（4）樣品的制備

稱取粉碎均勻的糕點樣品2.5g置50mL離心管中，加25mL水，各加5mL106g/L亞鐵氰化鉀溶液和5mL219g/L乙酸鋅溶液，渦旋10min后，加水定容至50mL，經(jīng)10000r/min冷凍離心10min后取出，量取上清液5mL過QasisWAX固相萃取小柱（預(yù)先經(jīng)3mL甲醇以及3mL水活化），棄去流出液，依次用6mL2％甲酸和6mL純化水清洗，再用5％氨化甲醇洗脫并收集于15mL離心管中，在40℃水浴中氮吹至近干后取出放置室溫，用5mL水復(fù)溶殘渣，過0.45μmGHP微孔濾膜后，待測。

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