胭脂蟲紅色素是近年來逐步受到廣泛應用的天然色素，是從寄生在仙人掌上的胭脂蟲雌蟲體內提取出的一種天然蒽醌類色素，主要成分是胭脂紅酸。20世紀90年代，我國首次從國外引進胭脂蟲，并人工繁養(yǎng)成功，2002年在云南省有規(guī)劃種植胭脂蟲。胭脂蟲紅因其穩(wěn)定、安全等特點，已成為優(yōu)質的食用色素，它是一種美國食品和藥品監(jiān)督管理局（FDA）允許既可用于食品，又可用于藥品和化妝品的天然色素。

國家標準GB2760-2014中對胭脂蟲紅在不同種類食品中的使用限量進行了要求。國外一般采用美國化學品法典（FCC）的標準法測定胭脂蟲以及其相關產品中的胭脂蟲紅的含量，我國食品添加劑委員會則采用吸光度來表示胭脂蟲紅的含量，但是以上兩種方法不能應用于食品中胭脂蟲紅含量的測定。近年來食品中胭脂蟲紅的相關檢測方法的研究不斷出現(xiàn)，如反相薄層色譜（TLC）/光密度掃描分析法、高效毛細管電泳法、液相色譜法和超高效液相色譜—質譜聯(lián)用法，但是以上研究所涉及的食品種類較少。本文針對不同類型食品，包括糕點、餅干、糖果、巧克力、熟肉制品等五種，研究了胭脂蟲紅提取的前處理方法，建立了高效液相色譜法測定食品中的胭脂蟲紅的含量，可為以后食品中胭脂蟲紅的監(jiān)督檢測提供有效的參考方法。

一、實驗部分

1、樣品采集

采集了5種不同類型的樣品，包裝規(guī)格分為盒裝、袋裝及散裝，分別為雙莓味紅絲絨蛋糕、香腸（原味）、棒棒糖、草莓味夾心餅干、巧克力豆。以上樣品依次編號為1～5#。

2、儀器與試劑

Agilenttechnologies1260型高效液相色譜儀（美國Agilent）；分析天平（德國Sartorius）；臺式冷凍離心機3K15（德國SIGMA）；恒溫水浴鍋DKZ-2B（上海精宏）；旋渦混勻器基本型-MS3basic（德國IKA）；聚酰胺固相萃取小柱（60mg/3mL）。

胭脂紅酸（CAS1260-17-9，純度91.7%，德國Dr.EhrenstorferGmbH）；乙腈；0.01%、0.05%、0.1%甲酸水溶液；0.1%磷酸水溶液；2mol/L鹽酸溶液；酸化甲醇（甲酸∶甲醇=1∶50；v∶v）；氨水甲醇（體積分數為5%的氨水∶甲醇=1∶1；v∶v）；超純水。

3、實驗條件

（1）標準溶液的配制

準確稱取胭脂蟲紅酸標準品0.1090g（精確稱量至0.0001g）于100mL容量瓶中，用超純水溶解、定容，配制成質量濃度為1000mg/L的儲備液（于4℃下保存，保存期3個月）。以胭脂紅酸標準溶液為母液，以超純水為稀釋液配制成質量濃度分別為2.50、5.00、10.0、20.0、40.0、100mg/L系列標準溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

（2）樣品前處理

①樣品的制備：將樣品用粉碎機充分粉碎，后裝入潔凈的可密封盛樣容器中，密封并標明標記，于0℃～4℃冷藏保存。

②樣品的提取與凈化：稱取粉碎均勻的樣品2g置于50mL離心管中，加入2mol/L鹽酸溶液10mL，旋緊蓋子，置于80℃水浴中30min，取出冷卻，之后再加入甲醇15mL，振搖混勻，待凈化。

（3）色譜條件

（a）色譜柱：Agilent5TC-C185μm×4.6mm×150mm；

（b）柱溫：35℃；

（c）進樣量：20μL；

（d）檢測波長：276nm；

（e）流速：1.0mL/min；

（f）流動相：A：0.05%甲酸水溶液；B：乙腈；梯度洗脫程序見表1。

二、結果與討論

1、色譜條件的選擇

（1）檢測波長的選擇通過二極管陣列檢測器（DAD檢測器）在190～600nm處進行掃描，結果見圖1，發(fā)現(xiàn)胭脂紅酸在紫外區(qū)最大吸收波長為276nm，在可見光區(qū)最大吸收波長為494nm。為對兩個波長的檢測結果進行比較，本研究檢測波長同時選擇276nm和494nm。如圖2所示，胭脂紅酸在276nm處吸收峰響應值最大，峰形較好。在494nm處峰形最好，且雜質干擾較小，但響應值不如276nm。為了達到更低的檢出限，減少定量誤差，試驗選擇檢測波長為276nm。

（2）流動相的選擇

本實驗選用TC-C18（4.6mm×150mm，5μm）柱，通過實驗分別比較了不同類型、不同比例的流動相的分離效果。在考慮色譜柱的耐酸性能基礎上，實驗分別用純水、磷酸溶液、甲酸溶液作為水相，乙腈為有機相，共研究了乙腈-純水、乙腈-磷酸溶液、乙腈-甲酸溶液三種體系對測定的影響。結果表明使用乙腈-純水作為流動相時，完全洗脫不出；使用乙腈-磷酸溶液作為流動相時，出峰時間較慢，峰形出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象；使用乙腈-甲酸溶液作為流動相時，分離效果好，峰形對稱。

實驗發(fā)現(xiàn)，pH的降低有利于改善胭脂紅酸的峰形。本實驗比較了分別以0.01%甲酸溶液和0.05%甲酸溶液作為流動相的分離效果，如圖3。甲酸濃度為0.01%時，出峰時間延后，響應值足夠高，然而峰形出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，峰較寬且不對稱；甲酸濃度為0.05%時，響應值足夠高且峰形效果好。因此本實驗選擇乙腈-0.05%甲酸溶液體系作為流動相，梯度程序淋洗。

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