（3）反應時間的選擇。取8支比色管，加入標準溶液后分別置于沸水浴中，按照6min、8min、10min、12min、14min、16min、18min、20min的反應時間，考察最后吸光值的變化情況，結(jié)果見圖3。

由圖3可知，在6－13min，溶液的顏色較淺，顯色不完全，吸光度也較小，隨著水浴時間的延長，尿素顯色反應吸光值呈逐漸上升趨勢，增加較明顯；在14－18min，溶液的吸光度比較穩(wěn)定，可顯色完全，吸光值基本達到最大值。為了提高效率，沸水浴時間定為14min。

（4）標準曲線的建立。取8支25mL具塞比色管，分別加入100mg/L的尿素標準使用液0mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00mL。在上述各管中分別加入2.0mL二乙酰一肟溶液，再加入三氯化鐵－氨基硫脲－硫酸混合試劑10.0mL，混勻后用純水稀釋至25mL。分別配制成0mg/L、2mg/L、4mg/L、8mg/L、16mg/L、24mg/L、32mg/L、40mg/L的尿素標準系列，相當于
每個管中相當標準物質(zhì)的質(zhì)量為0.00mg、0.05mg、0.10mg、0.20mg、0.40mg、0.60mg、0.80mg、
1.00mg。將上述各管在沸水浴中加熱14min，置流動自來水中冷卻2min。以純水作參比，用1cm比色
皿，在525nm處測定各管吸光度值，以尿素含量對吸光度做回歸分析。根據(jù)最佳實驗條件，對尿素標準溶液進行吸光度的檢測，得到不同濃度的尿素和吸光度的關系標準曲線，進而得到標準曲線的方程為：y＝0.7629x＋0.0331，相關系數(shù)：r＝0.9992。詳見表1和圖4。

（5）精密度測定。對同一種乳樣的尿素含量平行測樣9次，先由繪制的標準曲線查得樣品管中尿素的質(zhì)量，再由下述公式計算得出結(jié)果，如表2所示。

由表2可以看出，該方法精密度較好，其相對標準偏差小于2.0％。

（6）乳樣中尿素回收率的測定。取同一品牌乳樣3份，其中1份作為本底樣處理，另外2份添加不同濃度的尿素標準溶液，混勻靜置。同時對3份樣品前處理后，再按上述實驗方法進行測定。根據(jù)如下公式來計算樣品回收率，結(jié)果如表3所示。

由表3可知，該方法的回收率較好，低濃度和高濃度加標回收均達到97％。

4.乳樣中尿素含量的測定結(jié)果。根據(jù)最佳實驗條件，按照實驗方法對12種不同品牌牛乳中尿素的含量進行測定，結(jié)果如表4所示。

三、討論
利用二乙酰一肟分光光度法來測定牛乳中尿素的含量，該方法標準曲線線性相關r＝0.9992，檢出限為0.020mg/L，樣品測定的精密度為RSD＝1.9％（n＝9），低濃度和高濃度加標回收均達到97％。該方法
操作簡單快速，可以很好地應用于日常對牛乳中尿素含量的檢測。運用該法對超市及農(nóng)貿(mào)市場銷售的12種不同袋裝奶及散裝奶中尿素含量進行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，尿素含量最低的是10#樣品（159mg/L），含量最高為11#樣品（645mg/L），大部分測定結(jié)果在200－400mg/L左右。杜彥山、張志國等人曾測得牛奶中尿素含量為224.7mg/L，和本實驗中的幾個數(shù)據(jù)較為接近，但5#、9#、11#樣品的尿素含量遠遠高于300mg/L，很有可能是摻假牛乳。

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