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采用高速剪切法,對不同pH值條件下大豆分離蛋白和TSG的乳化性和乳化穩(wěn)定性進行測定,結(jié)果如圖3及圖4所示。
pH值對TSG和大豆分離蛋白乳化性及乳化穩(wěn)定性影響結(jié)果如圖3所示。由圖可知,隨著pH值的升高,二者變化趨勢保持一致,乳化性呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢,乳化穩(wěn)定性則先升高后降低。在等電點pH4.5附近時,相較于其它pH值條件下,兩種蛋白的乳化性均最差,乳化穩(wěn)定性最佳。在pH4.0~10.0范圍內(nèi)TSG的乳化性優(yōu)于大豆分離蛋白,pH7.0時,TSG及大豆分離蛋白的乳化穩(wěn)定性相同均為100%。堿性條件pH9.5及10.5時TSG的乳化性最佳為(60.53±1.81)%和(61.54±3.81)%,分別高于大豆分離蛋白9.25%,8.38%。此外由圖4可知,pH4.5時TSG和大豆分離蛋白的乳液粒徑較大,分布不均勻且覆蓋率低,此條件下蛋白不足以包裹所有油滴,因而導(dǎo)致乳化性較差。
蛋白質(zhì)乳化性和乳化穩(wěn)定性的影響因素眾多,包含介質(zhì)的pH值,蛋白溶解度,疏水性基團及分子大小等。穩(wěn)定的乳狀液依賴于蛋白質(zhì)的溶解度,在等電點處蛋白的正負電荷相互抵消,凈電荷為零,蛋白質(zhì)載量易在乳狀液界面達到最高,有利于高黏性膜的形成,因此具有較高的乳化穩(wěn)定性,且在等電點狀態(tài)時蛋白質(zhì)會發(fā)生絮凝沉淀,溶解度最小,乳化性較差。當pH值遠離等電點時,蛋白溶解度增加,由于表面活性組分中極性基團的離子化引起靜電排斥作用,因而破壞界面膜的結(jié)合力,致使乳化性逐漸提高,乳化穩(wěn)定性下降。同時,蛋白的高溶解度和較小分子尺寸可增強蛋白質(zhì)分子與脂質(zhì)之間的相互作用從而提高蛋白的乳化性。此外,乳化性和乳化穩(wěn)定性還與蛋白質(zhì)的疏水-親水平衡有關(guān),疏水-親水基團間的失衡會導(dǎo)致蛋白的疏水性增加,進而降低其乳化性,適量蛋白質(zhì)疏水基團的暴露可以促進蛋白質(zhì)與油分子的相互作用,促使更多的蛋白質(zhì)包覆在油分子表面,從而降低油水界面張力,提高蛋白的乳化穩(wěn)定性。另外,增加蛋白質(zhì)中游離巰基的含量有利于形成二硫鍵,可促使形成更穩(wěn)定和致密的界面膜。TSG的溶解性較好,分子質(zhì)量較小,游離巰基含量高,這些因素均導(dǎo)致其乳化性能優(yōu)于大豆分離蛋白。
乳液的油滴粒徑及蛋白覆蓋率是評價其乳化性及乳化穩(wěn)定性的重要指標。粒徑越小,乳液析出速率越慢,因而乳化液越穩(wěn)定;同時較小的油滴粒徑可使蛋白質(zhì)形成維持較大表面積的界面膜,增強蛋白質(zhì)展開和包裹油滴的能力。若蛋白質(zhì)覆蓋率不足或油相大面積暴露,油滴為保持穩(wěn)定趨于與鄰近油滴共享蛋白質(zhì),致使蛋白絮凝形成極不穩(wěn)定的乳液;而當?shù)鞍踪|(zhì)覆蓋率較高時,蛋白質(zhì)分子可完全包裹油滴,且蛋白質(zhì)分子層之間的作用力,如空間排斥和靜電排斥等,可使乳液更加穩(wěn)定。由圖3可知,TSG和大豆分離蛋白的乳化穩(wěn)定性均較高,TSG的乳液平均粒徑小,蛋白覆蓋率高,這是其乳化性優(yōu)于大豆分離蛋白的原因。因此,TSG較高的乳化性和乳化穩(wěn)定性使其在產(chǎn)品配方和食品工業(yè)中得到廣泛應(yīng)用。
本文主要研究TSG的結(jié)構(gòu),功能特性及構(gòu)效關(guān)系,結(jié)果表明TSG的分子質(zhì)量分布在10~70ku,且在35.34及13.83ku處的蛋白表達量最高,為低分子質(zhì)量蛋白質(zhì)。TSG中游離巰基及二硫鍵含量較高,分別為(33.97±2.94)μmol/g,(44.08±3.79)μmol/g。氨基酸組成分析結(jié)果顯示TSG中氨基酸種類較齊全,其中必需氨基酸含量為45.85%,親水性氨基酸含量為54.98%。對TSG功能特性檢測發(fā)現(xiàn)其具有良好的溶解性、乳化性和乳化穩(wěn)定性,這與構(gòu)效分析結(jié)果相符合。由此可見,蛋白質(zhì)的功能特性與其分子的大小、巰基二硫鍵含量、氨基酸構(gòu)成等因素密切相關(guān)。此外,上述結(jié)果表明TSG的分子質(zhì)量較小,游離巰基及親水氨基酸含量較高,其溶解性、乳化性優(yōu)于大豆分離蛋白。因此,該TSG蛋白在食品工業(yè)中擁有廣泛的市場前景也為日后TSG的研究及開發(fā)利用提供了一定的科學(xué)依據(jù)。
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