甲醛是生物體代謝的一種成分，是一種對細(xì)胞有害的毒物，能夠破壞生物體的蛋白和酶，使組織細(xì)胞產(chǎn)生不可逆的毀壞，造成細(xì)胞死亡。我國有規(guī)定禁止在國家標(biāo)準(zhǔn)以外的食品中以任何形式添加甲醛。但是還有一些不法商販為了獲取利益，利用甲醛定型、防腐，在肉類食品中添加甲醛，造成甲醛檢測量超標(biāo)，嚴(yán)重?fù)p害消費者健康，引起嚴(yán)重的食品安全問題。甲醛的檢測方法有分光光度法氣相色譜質(zhì)譜法、高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）[6-7]和電化學(xué)法等。HPLC檢測具有干擾很小，操作簡單，靈敏度高的特點，所以被廣泛地應(yīng)用在各行各業(yè)的甲醛檢測領(lǐng)域。本文中運用直接衍生化的高效液相色譜法來檢測肉類零食中甲醛的含量，檢測的結(jié)果準(zhǔn)確，靈敏度獲得了較大的提升，能夠提供建立肉類零食中甲醛含量的測定的方法的有效依據(jù)。

1.材料和方法

(1)材料與試劑

肉類零食，甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液（100μg/mL），色譜純的甲醇和乙腈，實驗用水為millipore用水；2，4-二硝基苯肼 （色譜純）；其他試劑（分析純）。

(2)設(shè)備

e2695高效液相色譜儀；色譜柱為WelchXB-C18（4.6mm× 250mm，5µm），組織搗碎機、恒溫水浴鍋、高速離心機。

(3)實驗方法

①溶液配制

1，4-二硝基苯肼-乙腈溶液：用天平稱量0.15g2，4-二硝基苯肼，用乙腈溶解定容至一升，配制成0.15g/L的2，4-二硝基苯肼-乙腈溶液；磷酸鹽緩沖溶液：用電子天平稱31.2gNaH2PO4·2H2O，用水溶解定容至一升，配制成0.2mol/L的NaH2PO4溶液；衍生液的配制：把磷酸鹽緩沖溶液和2，4-二硝基苯肼-乙腈溶液以體積比為1:1混合均勻。

②樣品溶液的制備

用研磨機把肉類零食磨碎，用天平稱量2.0g，把待檢測的樣品放在50mL帶塞子的離心管中，在管中加入配好的衍生溶液20mL，來回震蕩使之混合均勻，選擇60℃條件作為水浴反應(yīng)的溫度，反應(yīng)時間為1h，反應(yīng)結(jié)束后把離心管從水浴中取出自然冷卻至室溫，用離心機離心收取上清過濾，在高效液相色譜上檢測。

③色譜條件

選擇WelchXB-C18（4.6mm×250mm，5µm）作為色譜柱，體積比為70:30的乙腈-水作為流動相，控制流速為0.6mL/min，在37℃的溫度下反應(yīng)，選擇355nm作為檢測波長，進(jìn)樣量是10µL，采用等度洗脫。

④標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

在有刻度的50mL離心管中分別加入體積數(shù)不同的甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液，再加入衍生液至20mL，混合均勻，配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度分別為0µg/mL、0.1µg/mL、0.2µg/mL、0.5µg/mL、1.0µg/mL、2.0µg/mL、3.0µg/mL，選擇60℃條件作為水浴反應(yīng)的溫度，反應(yīng)時間為1h，反應(yīng)結(jié)束后把離心管從水浴中取出自然冷卻至室溫，用離心機離心收取上清過濾，在高效液相色譜上檢測，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)曲線計算樣品中含有甲醛的量。

2.結(jié)果與討論

(1)確定衍生溫度和反應(yīng)時間

本研究中的衍生溫度分別是30℃、40℃、50℃、60℃、 70℃、80℃，設(shè)置三個添加水平，分別為2µg、10µg和40µg，選擇衍生時間是一小時，通過實驗來確定最佳的衍生溫度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在60℃時產(chǎn)物的量最大，隨著溫度的升高會有下降。此結(jié)果也和相關(guān)文獻(xiàn)中報道的一致，甲醛在60℃時
反應(yīng)較快。

在之前實驗的基礎(chǔ)上，在60℃條件下反應(yīng)時間分別是20min、40min、60min、90min、120min，設(shè)置三個添加水平，分別為2µg、10µg和40µg，通過實驗來確定最佳的反應(yīng)時間。在反應(yīng)1h的結(jié)果做出標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回收率。如表1所示，發(fā)生反應(yīng)的時間在60min（包含60min）以上，回收率都在90%以上，隨著反應(yīng)時間的延長，回收率也在升高，但是變化的不明顯，從投入產(chǎn)出比的角度綜合考慮，選擇反應(yīng)溫度為60℃和衍生時間為60min。

(2)線性范圍與檢測限

之前配制好的甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液，在反應(yīng)溫度為60℃和衍生時間為60min的條件下反應(yīng)，在前述的色譜條件下檢測，設(shè)置空白對照，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1所示。根據(jù)圖1可以看出，甲醛質(zhì)量濃度線性范圍很好的濃度是在0μg/mL～3.0μg/mL，將肉類零食粉碎后加入標(biāo)準(zhǔn)溶液依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的方法處理后，用色譜測定，去除空白對照后計算出檢出限，結(jié)果表明加樣量是2g時，本實驗的最低檢出濃度為0.08mg/kg。

(3)回收率

將粉碎研磨均勻的肉類零食樣品，分別加入 2 µ g、 10µg、40µg3個水平的甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述方法來計算回收率，每個水平做3個重復(fù)，計算回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果如表2所示。從表中可以看出平均回收率的范圍是87.11%-94.25%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差是0.67%-3.57%。

(4)精密度

取用研磨均勻的同一份3份，加入120µL 100µg/mL的甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液，優(yōu)化好的實驗條件下進(jìn)行精密度實驗，測定結(jié)果如表3所示。顯示結(jié)果為相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.58%，表明此方法具有很好的精密度。

3.結(jié)論

本文中的實驗是用衍生液直接提取，用高效液相色譜法來檢測肉類零食中含有甲醛量的分析方法。本方法是將提取和衍生一起進(jìn)行，不僅節(jié)省前處理時間，還能使實驗操作變得簡便。本文中建立的檢測方法具有精密度好，靈敏度高，準(zhǔn)確性好的優(yōu)勢，能夠在肉類零食中甲醛含量測定上應(yīng)用。

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