標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)網(wǎng)-真菌毒素的課程講師圖" src="https://shijiaoke.oss-cn-beijing.aliyuncs.com/News/zhaoxiaocaokechnegjieshaotu20200429.png" style="width: 800px; height: 447px;" />

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真菌毒素是真菌生長(zhǎng)過程中產(chǎn)生的代謝物，污染食品與農(nóng)作物，給人的身體健康帶來一定的危害，對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)具有巨大的危害性。了解常見的真菌毒素的危害及其檢測(cè)方法，可以為進(jìn)一步控制真菌毒素污染提供參考價(jià)值。

一、真菌毒素的概念

真菌：是一類有細(xì)胞壁，不含葉綠素，無根莖葉，以腐生或寄生方式生存，能夠及進(jìn)行有性或無性繁殖的微生物；

霉菌：是絲狀比較發(fā)達(dá)的小型真菌的俗稱；

真菌毒素：是由真菌產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物。即由細(xì)胞增殖過程中形成的丙酮酸、酯酸、氨基酸等初級(jí)代謝產(chǎn)物作為前提物質(zhì)，進(jìn)行生物合成的物質(zhì)。一般分為霉菌毒素和蘑菇毒素。

二、真菌毒素的種類

已知有200多種不同的真菌毒素，一般同時(shí)具有毒性強(qiáng)和污染頻率高的特點(diǎn)。其中包括：黃曲霉毒素B1和M1 (Aflatoxins, FB1、FM1)；赭(棕)曲霉毒素A (Ochratoxin A, 0A) 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(嘔吐毒素) (Deoxynivalenol, DON)； 玉米赤霉烯酮(Zearalenone, ZEN(F-2)) ； T-2毒素(T -2 toxin,T-2)； 伏馬霉素； 展青霉素(棒曲霉毒素) (Patulin, PTL)；雜色(柄)曲霉毒素(terigmatocystin)； 串珠鐮刀菌素(Moniliformin, MF)三硝基丙酸； 二乙酰鑣草鐮刀菌烯醇(Diacetoxyscirpenol DAS)、麥角堿、黃米毒素、島青霉毒素、橘青霉素、皺褶青霉素、黃綠青霉素、紅矢精、黃綠素、圓弧青霉偶氮酸和F- 2毒素等。

（1）真菌毒素之黃曲霉毒素

黃曲霉毒素(Aflatoxins。簡(jiǎn)寫AFT)是黃曲霉、寄生曲霉及溫特曲霉等產(chǎn)毒菌株的代謝產(chǎn)物，是群結(jié)構(gòu)類似的化合物。目前已發(fā)現(xiàn)17種黃曲霉毒素。根據(jù)其在波長(zhǎng)為365nm紫外光下呈現(xiàn)不同顏色的熒光而分為B、G二大類:

B大類在氧化鋁薄層板上于紫外光照射下呈現(xiàn)藍(lán)色熒光；

G大類則呈綠色熒光。

（2）真菌毒素之赭曲霉素

毒性：主要對(duì)腎產(chǎn)生危害，造成腎腫大，當(dāng)濃度超過5mg/Kg時(shí)，對(duì)肝臟組織和腸道產(chǎn)生破壞，引起腸炎等。無色結(jié)晶化合物，易溶于極性溶劑和稀的碳酸氫鈉水溶液中，微溶于水，在紫外光照射下，呈綠色熒光，該化合物穩(wěn)定，在乙醇中置冰箱避光保存一年以上而不被破壞，但在谷物中隨時(shí)間延長(zhǎng)而降解。

存在于：糧谷物、大豆、葡萄及葡萄酒、咖啡、可可和巧克力、中草藥、調(diào)味料、啤酒等。

檢測(cè)方法：薄層層析法、液相色譜法。

（3）真菌毒素之玉米赤霉烯酮

玉米赤霉烯酮也稱F-2毒素。鐮刀菌屬的多個(gè)菌種如禾谷鐮刀菌、三線鐮刀菌、粉紅鐮刀菌、半裸鐮刀菌、木賊鐮刀菌、黃色鐮刀茵、茄病鐮刀菌、串珠鐮刀菌等都可以產(chǎn)生該毒素。這些菌廣泛存在于土壤、空氣及污染的谷物中，主要污染玉米，也污染大麥、小麥、燕麥等。玉米的陽性檢出率可達(dá)45%，最高含毒量可達(dá)2909 mg/蠅，小麥的陽性檢出率可達(dá)20%，含毒量為0.36~11.05 mg/k。

檢測(cè)方法：高效液相色譜法。

（4）真菌毒素之伏馬菌素

自然界中最為普遍，毒性強(qiáng)，損傷肝腎功能白色粉末，易溶于水、甲醇、乙腈等溶劑，在甲醇溶液中不穩(wěn)定，在乙腈水溶液中非常穩(wěn)定。

檢測(cè)方法：高效液相色譜法。

（5）真菌毒素之展青霉素

展青霉毒素是多種真菌的有毒代謝產(chǎn)物，該物質(zhì)方面是一種廣譜的抗生素，另一方面對(duì)小鼠、兔子等試驗(yàn)動(dòng)物具有較強(qiáng)的毒性。其污染食品和飼料后產(chǎn)生的毒性遠(yuǎn)大于其抗菌作用。

（6）真菌毒素之雜色曲霉毒素

毒性：引起腫瘤

污染：小麥、大麥、玉米、花生、大豆、咖啡豆、火腿、奶酪等。易溶于氯仿、苯、吡啶、乙腈，微溶于甲醇、乙醇，不溶于水和堿性溶液。在紫外線照射下，呈磚紅色熒光。

檢測(cè)方法：薄層法，紫外分光光度計(jì)測(cè)定。

三、真菌毒素的檢測(cè)

（一）前處理

1. 采樣和樣品的準(zhǔn)備

（1）根據(jù)分析目的的不同確定采樣地點(diǎn)，如：農(nóng)田、倉(cāng)庫(kù)、加工廠、運(yùn)輸工具、零售商和醫(yī)院等。

（2）采樣方法：

靜態(tài)樣品：麻袋、箱柜和車廂等容器存放分樣品均屬靜態(tài)樣品。

采樣工具：頂端尖銳的長(zhǎng)柄采樣釬子。

采樣數(shù)量：小批量時(shí)采1/4；大批量時(shí)為整批麻袋數(shù)。

動(dòng)態(tài)樣品：用商品化的十字交叉切分自動(dòng)采樣器。

（3）采樣量采大樣，按四分法對(duì)角連續(xù)多次分樣縮減至1 - 2kg，最后取代表樣全部粉碎。美國(guó)農(nóng)業(yè)部USDA的方法：成批樣每批取3份大樣，每份22kg。實(shí)驗(yàn)室分析用的樣品為1- 5kg。

2.提取

（1）提取溶劑

溶劑的選擇取決于待測(cè)毒素的種類、毒素性質(zhì)、毒素在提取溶劑中的溶解度、提取溶劑的毒性價(jià)格、非測(cè)定成分在提取溶劑中的分配系數(shù)等。毒性小、極性大、價(jià)格低廉的溶劑系統(tǒng)。

常用溶劑：甲醇、氯仿、丙酮、己烷、乙酸乙酯、乙睛和水中一種或多種不同配比的混合物。

（2）提取溫度

溫度影響毒素的回收率，適當(dāng)升高溫度可以增加毒素的回收率。

（3）食品基質(zhì)

固體食品：選用浸劑、洗脫、索氏回流等方法。

液體食品：液-液分配方法

3.純化

純化：在確保不損失待測(cè)毒素的前提下除去干擾雜質(zhì)的過程稱為純化。

常用凈化方法：液-固萃取、液-液分配、化學(xué)吸附、色譜法、透析法以及SFE法等。使用最廣泛的是色譜法。

色譜法：薄層色譜法(柱色譜法最常用)

吸附色譜柱常用的吸附劑：硅膠、礬土、氧化鋁、活性炭、弗羅里硅土。

分配色譜柱常用的填充劑：硅藻土、纖維素。

固相提取 (廣泛采用) ；免疫親和柱IAC (應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品的新技術(shù))。

（二）真菌毒素的檢測(cè)方法

1.薄層色譜測(cè)定法

實(shí)驗(yàn)原理：樣品經(jīng)提取、凈化、薄層分離后，某些真菌毒素在紫外光下，產(chǎn)生特定熒光，以標(biāo)準(zhǔn)品做參比，根據(jù)其在薄層上顯示的熒光的最低檢出量來定量。

適用范圍：適合于本身能夠產(chǎn)生熒光的真菌毒素。如：AFB、OTA

優(yōu)點(diǎn)：經(jīng)濟(jì)、對(duì)設(shè)備和檢驗(yàn)人員要求不高。

2.高效液相色譜法

實(shí)驗(yàn)原理：樣品中的真菌毒素經(jīng)柱層析分離后，通過測(cè)量色譜峰的面積定量。

優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高、定量準(zhǔn)確。

分析時(shí)應(yīng)該考慮流動(dòng)相、色譜柱、柱溫和檢測(cè)器等分析條件，找出最佳配比。

有熒光的用熒光檢測(cè)器，B類單端孢霉烯族化合物本身不產(chǎn)生熒光，但C6位置上有酮基，可配紫外檢測(cè)器檢測(cè)。

應(yīng)用：選擇高效液相-熒光分光光度法是定量測(cè)定農(nóng)產(chǎn)品中玉米赤霉烯酮污染最可靠、亦是最常用的方法。

3.免疫親和柱-熒光計(jì)快速檢測(cè)法

實(shí)驗(yàn)原理：利用抗原一抗體免疫反應(yīng)的原理，使用大劑量的單克隆抗體，選擇性的將樣品提取液中的黃曲霉毒素吸附，用水將雜質(zhì)洗脫除去，再用甲醇定量將黃曲霉毒素洗脫，達(dá)到分離凈化目的。

免疫反應(yīng)：指抗原和抗體分子的結(jié)合?？乖贵w復(fù)合物的形成要求二者結(jié)構(gòu)有互補(bǔ)性，抗原與抗體的結(jié)合液因此具有高度特異性。

優(yōu)點(diǎn)：高度特異性、高靈敏度、快速簡(jiǎn)便等。

4.快速檢測(cè)卡檢測(cè)法

檢測(cè)原理：測(cè)定基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，抗體連接在柱體內(nèi)，樣品經(jīng)過提取、過濾后，緩慢的通過赭曲霉毒素的免疫親和柱，在免疫親和柱內(nèi)毒素與抗體結(jié)合，之后洗滌免疫親和柱，除去沒有被結(jié)合的其他無關(guān)物質(zhì)。用甲醇洗脫赭曲霉毒素A，然后再注入到分析儀器中用于檢測(cè)。