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志賀氏菌標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法(二)

發(fā)布時間:2021-02-26 10:30 編輯者:偉業(yè)計量

歷來以甘露醇和乳糖發(fā)酵的特性來區(qū)分志賀氏菌的生化群:

A群(痢疾志賀氏菌):為甘露醇陰性,乳糖陰性。

B群(福氏志賀氏菌)和C群(鮑氏志賀氏菌):為甘露醇陽性,乳糖陰性。

D群(宋內(nèi)氏志賀氏菌):為甘露醇陽性,乳糖陽性(或遲緩發(fā)酵)。

(四)血清學(xué)性狀

志賀氏菌屬的O抗原(菌體抗原),在血清學(xué)上有重要的鑒別意義,該菌屬無鞭毛抗原,部分菌株由于K抗原(莢膜抗原)的存在,阻止了O抗原的正常凝集時,可加熱處理后,再進行凝集試驗。A群(志賀氏痢疾菌)包括12個血清型,其O抗原均具有單一的特異性,其中1型即志賀氏痢疾桿菌,2型為斯密氏痢疾桿菌,其他各型國內(nèi)罕見。B群(福氏志賀氏菌)為1~6型,該群抗原較為復(fù)雜,每個血清型具有兩種抗原,即型抗原和群抗原,區(qū)分亞型和變種,C群(鮑氏志賀氏菌)為1~18型,D群(宋內(nèi)氏志賀氏菌)只有一個血清型。

三、培養(yǎng)基

(一)GN增菌液

成分:胰蛋白胨20g,葡萄糖1g,甘露醇2g,檸檬酸鈉5g,去氧膽酸鈉0.5g,磷酸氫二鉀4g,磷酸二氫鉀1.5g,氯化鈉5g,蒸餾水1000mL,pH7.0。

制法:將上述成分配好,加熱使溶解,校正pH,分裝每瓶225mL,115ºC:高壓滅菌15min。

(二)麥康凱瓊脂

成分:蛋白胨17g,所胨3g,豬膽鹽(或牛膽鹽)5g,氯化鈉5g,瓊脂17g,蒸餾水1000mL,乳糖10g,0.01%2吉晶紫水溶液10mL,0.5%中性紅水溶液5mL。

制法:將蛋白胨、豚胨、膽鹽和氯化鈉溶解于400mL蒸餾水中,校正pH為7.2,將瓊脂加入于600mL蒸餾水中,加熱溶化,將兩液合并,分裝燒瓶內(nèi),121ºC高壓滅菌15min備用,臨用時加熱溶化瓊脂,趁熱加乳糖,冷至50~55ºC時,加入結(jié)晶紫和中性紅水溶液,搖勻后傾注平板。

注:結(jié)晶紫和中性紅水溶液配好后須經(jīng)高壓滅菌。

(三)伊紅美藍瓊脂(EMB)

成分:蛋白胨10g,乳糖10g,磷酸氫二鉀2g,瓊脂17g,2%伊紅Y溶液20mL,0.65%美藍溶液10mL,蒸餾水1000mL,pH7.2。

制法:將蛋白胨、磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中,校正pH,分裝于燒瓶內(nèi),121℃高壓滅菌15min備用,臨用時加乳糖并加熱溶化瓊脂,冷至50~55℃加入伊紅和美藍溶液,搖勻,傾注平板。

(四)苯丙氨酸培養(yǎng)基

成分:酵母浸膏3g,DL-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸)2g,磷酸氫二鈉1g,氯化鈉5g,瓊脂12g,蒸餾水1000mL。

制法:加熱溶解后分裝試管,121℃高壓滅菌15min,使成斜面。

試驗方法:自瓊脂斜面上挑取大量培養(yǎng)物,移種于苯丙氨酸瓊脂,在36±1℃培養(yǎng)4h或18-24 h,滴加10%三氯化鐵溶液2~3滴,自斜面培養(yǎng)物上流下,苯丙氨酸脫氨酶陽性者呈深綠色。

(五)西蒙氏檸檬酸鹽瓊脂

成分:氯化鈉5g,硫酸鎂0.2g,磷酸二氫銨1g,磷酸氫二鉀1g,檸檬酸鈉5g,瓊脂20g,蒸餾水1000mL,0.2%溴麝香草酚藍溶液40mL,pH6.8。

制法:先將鹽類溶解于水內(nèi),校正pH,再加瓊脂,加熱溶化,然后加入指示劑,混合均勻后分裝試管,121℃葑壓滅菌:15min,放成斜面。

試驗方法:接種培養(yǎng)物,于36±1℃培養(yǎng)4d,每天觀察,陽性者斜面上有菌生長,培養(yǎng)基由綠色變?yōu)樗{色。

(六)葡萄糖銨瓊脂

成分:氯化鈉 5g,硫酸鎂(MgSO4·7H20)0.2g,磷酸氫二銨1g,磷酸氫二鉀1g,葡萄糖2g,瓊脂20g,蒸餾水1000mL,0.2%溴麝香草酚藍溶液40mL,pH6.8。

制法:先將鹽類和糖溶解于水內(nèi),校正pH,加入瓊脂,加熱溶化,然后加入指示劑,混合均勻分裝試管,121℃高壓滅菌15min,放成斜面。

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