(八)尿素瓊脂

蛋白胨1g，氯化鈉5g，葡萄糖1g，磷酸二氫鉀2g，0.4％酚紅溶液3mL，瓊脂20g，蒸餾水1000mL，20％尿素溶液100mL，pH7.2±0.1。

將除尿素和瓊脂以外的成分配好，并校正pH，加入瓊脂，加熱溶化并分裝燒瓶。121℃高壓滅菌15min。冷卻至50～55⁰C，加入經(jīng)除菌過濾的尿素溶液。尿素的最終濃度為2％，最終pH為7.2±0.1。分裝于滅菌試管內(nèi)，放成斜面?zhèn)溆谩?/p>

試驗方法：挑取瓊脂培養(yǎng)物接種，在36-1℃培養(yǎng)24h，觀察結果。

尿素酶陽性者由于產(chǎn)堿而使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。

(九)緩沖葡萄糖蛋白胨水(V—P試驗用)

V-P試劑

磷酸氫二鉀5g，多胨7g，葡萄糖5g，蒸餾水1000mL，pH7.0。

溶化后校正pH，分裝試管，每管1 mL，121⁰C高壓滅菌15min。

V—P試驗方法：用瓊脂培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中，于36±1℃培養(yǎng)2～4d。加入6％a-萘酚-酒精溶液0.5mL和40%氫氧化鉀溶液O.2mL，充分振搖試管，觀察結果。陽性反應立刻或于數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色，如為陰性，應放在36±l℃下培養(yǎng)4h再進行觀察。

(十)氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基

蛋白胨10g，氯化鈉5g，磷酸二氫鉀0.225g，磷酸氫二鈉5.64g，蒸餾水1000mL，O.5％氰化鉀溶液20mL，pH7.6。

將除氰化鉀以外的成分配好后分裝燒瓶，121⁰C高壓滅菌15min。放在冰箱內(nèi)使其充分冷卻。每100mL培養(yǎng)基加入0.5％氰化鉀溶液2.OmL(最后濃度為l:10000)，分裝于12mm×100mm滅菌試管，每管約4mL，立刻用滅菌橡皮塞塞緊，放在4⁰C冰箱內(nèi)，至少可保存2個月。同時，將不加氰化鉀的培養(yǎng)基作為對照培養(yǎng)基，分裝試管備用。

試驗方法：將瓊脂培養(yǎng)物接種于蛋白胨水內(nèi)成為稀釋菌液，挑取一環(huán)接種于氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基。并另挑取一環(huán)接種于對照培養(yǎng)基。36±1⁰C培養(yǎng)1～2d，觀察結果。如有細菌生長即為陽性(不抑制)，經(jīng)2d細菌不生長為陰性(抑制)。

氰化鉀是劇毒藥物，使用時應小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分裝培養(yǎng)基應在冰箱內(nèi)進行。試驗失敗的主要原因是封口不嚴，氰化鉀逐漸分解，產(chǎn)生氫氰酸氣體逸出，以致藥物濃度降低，細菌生長，因而造成假陽性反應。試驗時對每一環(huán)節(jié)都要特別注意。

(十一)蛋白胨水(靛基質(zhì)試驗用)

蛋白胨(或胰蛋白胨)20g，氯化鈉0g，蒸餾水1000mL，pH7.4。

按上述成分配制，分裝小試管，121⁰C高壓滅菌15min(蛋白胨中應含有豐富的色氨酸。購買每批蛋白胨后，應先用已知菌種鑒定后方可使用。)

(十二)靛基質(zhì)試劑

柯凡克試劑：將5g對二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中。然后緩慢加入濃鹽酸25mL。

歐一波試劑：將1g對二甲氨基苯甲醛溶解于95mL 95%酒精內(nèi)。然后緩慢加入濃鹽酸20mL。

試驗方法：挑取小量培養(yǎng)物接種，在36±1⁰C~培養(yǎng)1～2d，必要時可培養(yǎng)4～5d。加入柯凡克試劑約O.5mL，輕搖試管，陽性者于試劑層呈深紅色；或加入歐一波試劑約O.5mL，沿管壁流下，覆蓋于培養(yǎng)液表面，陽性者與液面接觸處呈玫瑰紅色。

(十三)半固體瓊脂

蛋白胨lg，牛肉膏0.3g，氯化鈉O.5g，瓊脂0.35～O.4g，蒸餾水100mL，pH7.4。

按以上成分配好，煮沸使溶解，并校正pH。分裝小試管。121⁰C葛壓滅菌：15min，直立凝固備用。

(十四)Elek氏培養(yǎng)基(毒素測定用)

豚胨20g，麥芽糖3g，乳糖O.7g，氯化鈉5g，瓊脂15g，40%氫氧化鈉溶液1.5mL，蒸餾水1000mL，pH7.8。

用500mL蒸餾水溶解除瓊脂以外的成分，煮沸，并用濾紙過濾。

用1mol／L氫氧化鈉校正pH。用另外500mL蒸餾水加熱溶解瓊脂。

將兩液混合，分裝試管：10mL或20mL。121⁰C高壓滅菌：15min。臨用時加熱溶化瓊脂傾注平板。

(十五)氧化酶試劑

1％鹽酸二甲基對苯二胺溶液：少量新鮮配制，于冰箱內(nèi)避光保存。

1％a-萘酚溶液。

取潔凈白濾紙沾取菌落。加鹽酸二甲基對苯二胺溶液一滴，陽性者呈粉紅色，并逐漸加深，再加一滴a-萘酚溶液，陽性者于30s內(nèi)呈現(xiàn)鮮藍色。陰性于2min內(nèi)不變色。

（十六）乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基

成分：蛋白胨20g，豬膽鹽（或牛、羊膽鹽）5g乳糖10g，0.04%溴甲酚紫水溶液25mL，蒸餾水1000mL，pH7.4。

(十七)三糖鐵瓊脂(TSI)制備方法培養(yǎng)基。

成分：蛋白胨20g，牛肉膏5g，乳糖10g，蔗糖10g，葡萄糖1g，氯化鈉5g，硫酸亞鐵銨[Fe(NH₄)₂(SO₄)]₂0.2g ，硫代硫酸鈉0.2g，瓊脂12g，酚紅0.025g，蒸餾水1000mL，pH7.4。

制法：將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，校正pH，加入瓊脂煮沸溶化，加入0.2％酚紅水溶液12.5mL，搖勻，分裝試管，121℃高壓滅菌15min，放置高層斜面?zhèn)溆谩?/p>

(十八)賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基制備方法培養(yǎng)基。

成分：蛋白胨5g，酵母浸膏3g，葡萄糖1g，蒸餾水1000mL，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，L-氨基酸或DL氨基酸0.5或1g/100mL。

制法：除氨基酸以外的成分加熱溶解后，分裝每瓶100mL，分別加入各種氨基酸：賴氨酸、精氨酸和鳥氨酸。L-氨基酸按0.5%加入，DL-氨基酸按1％加入，校正pH至6.8，對照培養(yǎng)基不加氨基酸，分裝于滅菌的小試管內(nèi)，每管0.5mL，上面加一層液體石蠟，115℃高壓滅菌10min。

試驗方法：接種培養(yǎng)物于36±1℃培養(yǎng)18-24h，觀察結果，氨基酸脫羧酶陽性者，由于產(chǎn)堿培養(yǎng)基應呈紫色，陰性者無堿性產(chǎn)物，但因葡萄糖產(chǎn)酸而使培養(yǎng)基變?yōu)辄S色，對照管應為黃色。

(十九)Honda氏產(chǎn)毒肉湯

水解酪蛋白20g，酵母浸膏粉10g，氯化鈉2.5g，磷酸氫二鈉15g，葡萄糖5g，微量元素O.5mL，蒸餾水1000mL，pH7.5。

制法：溶解后校正pH，高壓滅菌121⁰Cl5min，待冷45-50⁰C時加入林可霉素溶液，每毫升培養(yǎng)基內(nèi)含90μg。

微量元素配方：

硫酸鎂5g，三氯化鐵 O.5g，氯化鉆2g，蒸餾水100mL。

(二十)致病性大腸埃希氏菌診斷血清、侵襲性大腸埃希氏菌診斷血清、產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏診斷血清、出血性大腸埃希氏菌診斷血清。

(二十一)產(chǎn)腸毒素大腸埃希菌LT和ST酶標診斷試劑盒，上海市衛(wèi)生防疫站出品。

(二十二)抗LT抗毒素。

(二十三)多粘菌素B紙片：300IU，φ16mm。

(二十四)革蘭氏染色液。

參考資料：食品衛(wèi)生微生物檢驗標準手冊

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