3、測(cè)定方法

(1)方法一：50％乙睛-水[高效液相色譜級(jí)(HPLC級(jí))]作為流動(dòng)相，控制流動(dòng)相的流速為1.48～1.52mL/min。

控制0.05mol/L氫氧化鈉溶液和OPA-MERC反應(yīng)溶液(試劑制備見(jiàn)下)的流速分別為0.48～0.52mL/min。柱溫為35℃，水解室的溫度為100℃。熒光檢測(cè)器的激發(fā)波長(zhǎng)為340nm，發(fā)射波長(zhǎng)為455nm。狹縫寬度分別為15m和12nm。檢測(cè)器的光電倍增管設(shè)為低值，時(shí)間常數(shù)為1s。調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使1.0ng克百威溶液的響應(yīng)為記錄儀或積分儀量程的45％～55％?；€噪聲應(yīng)該＜2％，氨基甲酸酯類殺蟲劑應(yīng)按照?qǐng)D7-2的步驟洗脫。

如果系統(tǒng)停用幾天，則用甲醇代替水移動(dòng)相清洗系統(tǒng)。從儲(chǔ)液器中倒出氫氧化鈉和OPA-MERC反應(yīng)溶液，并用水清洗儲(chǔ)液器和相連的管子后，再用甲醇清洗。當(dāng)再次使用系統(tǒng)時(shí)，將流動(dòng)相改為水(HPLC級(jí))，在儲(chǔ)液器中加反應(yīng)溶液前用水清洗儲(chǔ)液器和相連管子。

過(guò)濾由凈化后所得到的圓底燒瓶中的甲醇提取液，將收集到的濾液(約4.5mL)置于10mL離心管或其他合適的容器中。因?yàn)闃悠窛舛纫阎?，因此收集的濾液體積多少不是十分重要。如果溶液要求稀釋，則吸取一定量溶液至另一容量瓶定容至一定體積備用。取10μL甲醇溶液進(jìn)樣。通過(guò)農(nóng)藥樣品在色譜圖上的保留時(shí)間來(lái)定性。通過(guò)將待測(cè)農(nóng)藥色譜峰的峰高或峰面積與已知量的標(biāo)準(zhǔn)樣品的峰高或峰面積相比較來(lái)測(cè)得未知農(nóng)藥殘留的含量。為了保證農(nóng)藥殘留量測(cè)定的可靠性，進(jìn)待測(cè)樣品后立即進(jìn)標(biāo)樣，待測(cè)樣品色譜峰和標(biāo)樣色譜峰應(yīng)匹配在±25以內(nèi)。

(2)方法二：此法用于不需要柱后水解和衍生化的熒光農(nóng)藥殘留檢測(cè)。高效液相色譜系統(tǒng)的建立與操作同上述方法一，區(qū)別在于：水解室在室溫下操作；熒光檢測(cè)器的激發(fā)波長(zhǎng)為288nm，發(fā)射波長(zhǎng)為330nm。將氫氧化鈉溶液和OPA-MERC反應(yīng)溶液加入流動(dòng)相時(shí)，關(guān)閉泵或氮?dú)饬鳌?/p>

測(cè)定操作方法同方法一。

(3)試劑制備

①乙腈：全玻璃蒸餾裝置重蒸。在使用前，進(jìn)行脫氣處理(將乙腈置于玻璃瓶中，抽真空并用磁力攪拌子緩慢攪拌5min)，經(jīng)過(guò)處理的乙腈優(yōu)于高效液相色譜級(jí)，可以避免產(chǎn)生雜峰。

②MERC：2-巰基乙醇(MERC)。

③甲醇：全玻璃蒸餾裝置重蒸。

④鄰苯二醛(OPA)：色譜級(jí)。

⑤0.05mol/L硼酸鈉緩沖溶液：稱取19.1g分析純：Na₂B₄0₇·10H₂0，用約500mL脫氣的高效液相色譜級(jí)水在水浴中加熱溶解，室溫下冷卻，再用脫氣的高效液相色譜級(jí)水定容至1L，輕輕地將溶液搖勻，盡量避免空氣進(jìn)入溶液中。

④0.05mol/L氫氧化鈉溶液：即取一份氫氧化鈉(碳酸鈉的含量＜5％)。用一份水溶解。塞緊蓋后靜置大約10d，直到碳酸鈉沉入下層。吸取27mL上部澄清的氫氧化鈉溶液，轉(zhuǎn)入10mL容量瓶，并用水定容，得到5mol/L氫氧化鈉溶液。吸取10mL5mol/L氫氧化鈉溶液，加入1L容量瓶中，用脫氣的高效液相色譜級(jí)水定容，輕輕地將溶液搖勻，盡量避免空氣進(jìn)入溶液中。

⑦水(高效液相色譜級(jí))：商品純水或用純化水裝置制備的蒸餾水或去離子水，用于高效液相色譜時(shí)，按乙腈脫氣的相同方法進(jìn)行脫氣。水必須盡量純化以防止堵塞高效液相色譜柱或出現(xiàn)異常峰形。用于高效液相色譜的水必須是高效液相色譜級(jí)的(不特別指明為高效液相色譜級(jí)的水是指蒸餾水)。

⑧OPA-MERC反應(yīng)溶液：稱取500mg鄰苯二醛(OPA)加入1L容量瓶中，用10mL甲醇溶解，加入500mL0.05mol/L硼酸鈉緩沖液和1mL2-巰基乙醇(MERC)。用硼酸鈉緩沖液定容，輕輕地將溶液搖勻，盡量避免空氣進(jìn)入溶液中。(從市場(chǎng)購(gòu)得的塑料瓶中的硼酸鹽溶液或者低純度的鄰苯二醛會(huì)造成熒光背景過(guò)高)。制備的溶液可以在室溫下保存2d，在冰箱或在氦氣保護(hù)下可以儲(chǔ)存1周左右。

二、苯脲類除草劑多殘留分析

(一)方法原理與適用性

苯脲類除草劑用甲醇提取，提取液采用液液分配和弗羅里硅土柱色譜凈化。殘留物采用反相柱，柱后光解、衍生化，衍生物經(jīng)高效液相色譜(HPLC)熒光檢測(cè)器檢測(cè)。

本方法可用于14種非脂肪性樣品中至少14種苯脲類除草劑在0.05mg/kg、0.5mg/kg和1.0mg/kg水平的殘留分析。

(二)標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

每種標(biāo)準(zhǔn)品用高效液相色譜級(jí)異丙醇配制儲(chǔ)備溶液(1mg/mL)。取適量的每種儲(chǔ)備標(biāo)準(zhǔn)溶液混合，用乙腈-水(高效液相色譜級(jí))(1∶1)稀釋成工作標(biāo)樣。用1.25μg/mL的標(biāo)樣進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)。儲(chǔ)備溶液保存在冰箱中，每周重新配制工作標(biāo)樣。

(三)提取

稱取50g樣品，加入離心瓶中，加100mL甲醇，用Polytron勻漿儀，速度8檔，勻漿1.5min。勻漿液以1500r/min離心5min，傾出80～100mL上清液，用玻璃棉過(guò)濾，250mL量筒接收。向離心瓶中加100mL甲醇，8檔勻漿1min。離心，上清液用玻璃棉過(guò)濾，全部轉(zhuǎn)入上面的250mL量筒。記錄全部甲醇提取液體積。

(四)液液分配

將甲醇提取液全部轉(zhuǎn)入500mL分液漏斗。加30mL飽和氯化鈉溶液和50mL正己烷，振搖30s，靜置分層。下層水相轉(zhuǎn)入1L分液漏斗中，分液漏斗中先加500mL水和30mL飽和氯化鈉溶液。棄去己烷相。向1L分液漏斗中加200mL二氯甲烷，振搖1min。二氯甲烷相經(jīng)25mm×50mm無(wú)水硫酸鈉柱脫水，轉(zhuǎn)入裝好的具5mL刻度接收瓶的500mLK-D濃縮器中。水相用100mL二氯甲烷提取2次，脫水后一并轉(zhuǎn)入K-D濃縮器。用50mL二氯甲烷淋洗硫酸鈉柱，淋洗液一并轉(zhuǎn)入K-D濃縮器。在K-D濃縮器中加入沸石，濃縮至約3mL，轉(zhuǎn)入弗羅里硅土柱凈化。

(五)弗羅里硅土柱凈化

稱取4g活化的弗羅里硅土，裝入10mm內(nèi)徑色譜柱，上面加1cm硫酸鈉，用30mL二氯甲烷預(yù)淋，棄去淋洗液。

當(dāng)二氯甲烷層接近硫酸鈉層頂部時(shí)，將具5mL刻度接收瓶的250mLK-D濃縮器置于色譜柱下。將濃縮的提取液轉(zhuǎn)入色譜柱，容器用約3mL二氯甲烷潤(rùn)洗，潤(rùn)洗液轉(zhuǎn)入色譜柱。

當(dāng)提取液接近硫酸鈉層頂部時(shí)，用3mL二氯甲烷淋洗色譜柱2次，使每次的淋洗液均接近硫酸鈉層頂部。最后一次潤(rùn)洗液接近硫酸鈉層頂部時(shí)，用50mL20％丙酮-二氯甲烷淋洗色譜柱。淋洗液在蒸汽浴上濃縮至約3mL，移去接收瓶，40℃水浴用氮?dú)鉂饪s至干。移取2mL乙腈-水(高效液相色譜級(jí))(1∶1)，加入接收瓶中。

(六)測(cè)定

測(cè)定采用高效液相色譜儀(HPLC)進(jìn)行，柱后光解、衍生，熒光檢測(cè)。

1、原理乙腈一水中的殘留物以甲醇一水為流動(dòng)相，經(jīng)C₁₈反相柱梯度洗脫、分離，柱中洗脫的殘留物(流出物經(jīng)過(guò)Teflon套管以增加在紫外光下的暴露)在線光解為胺，胺在線與鄰苯二醛及2-巰基乙醇反應(yīng)生成熒光基團(tuán)，通過(guò)熒光檢測(cè)器檢測(cè)。本法對(duì)苯脲類除草劑有極強(qiáng)選擇性。

2、儀器

(1)溶劑過(guò)濾裝置：具Luer—Lip頭的10mL注射器，配備直徑13mm的sueling不銹鋼過(guò)濾頭、直徑13mm的5μmLS型濾器或直徑13mm用聚丙烯固定的0.2μm尼龍濾膜。也可用元需注射器的預(yù)裝好的裝置。

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